【2017年整理】实验二 经口急性毒性实验.docVIP

实验二 经口急性毒性实验 一、实验目的 1、通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。 2、通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。 二、实验原理： 化学物经口染毒的方法是毒理学中重要的基本技术之一，经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。通过该实验学习化学物毒性试验的实验设计原则和掌握经口灌胃技术。 三、仪器、试剂与材料 1、器材 帆布手套、橡胶手套、电子天平、剪刀、大头针、小鼠鼠笼、泡沫塑料板、棉签、纱布、脱脂棉、小鼠灌胃针、1ml注射器、电子天平、动物体重秤等 2、试剂 敌百虫、苦味酸饱和溶液。 3、实验动物 成年、健康的雌、雄小鼠50只。 四、实验内容与步骤 1、实验动物的性别鉴定、编号、称重和分组 参考实验一中动物性别鉴定、编号和分组方法，50只小鼠，雌雄各半，随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、五组，各小鼠用电子天平称重，以g为单位，小数点后保留一位数字。 2、确定染毒剂量： 经预试验获得敌百虫0％～100％的致死剂量范围，由公式计算各组剂量公比值r： ，根据公比值确定各组正式剂量。 a：最低组剂量，mg/kg b：最高组剂量，mg/kg 3、配制毒物溶液 准确称取敌百虫2024mg，溶解并稀释至10 mL，取5 mL置于容器中，供第五组染毒；加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第四组动物染毒；再加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第三组动物染毒用，依此类推，可配制成按1:0.5递减的各剂量组不同浓度的溶液。 4、计算每只动物实际灌胃体积 每只小鼠实际灌胃量＝0.02 mL/g ×该小鼠体重g 5、染毒 （1）动物的禁食和复食：试验前，实验动物禁食过夜，不限制饮水，灌胃后2-3h后复食 （2）灌胃操作技术：同实验一小鼠灌胃染毒法。 6、中毒体征和死亡情况观察 染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间、死亡数量和时间及死亡前的特征。 高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。 根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。 观察的项目包括： （1）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝； （2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀； （5）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽； （6）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物； （7）消化系统：腹泻、厌食。 五、实验结果 1、急性毒性试验原始记录 组别： 染毒剂量： mg/kg 动物编号 性别 体重（g） 染毒剂量 （mL） 症状出现时间 死亡时间 2、求解敌百虫LD50的结果 组别 小鼠 (只) 剂量 (mg／kg) 对数剂量 死亡动物 (只) 死亡率 存活率 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 3．计算方式 根据正式实验各组死亡率按下列公式求出敌百虫的LD50和可信限(P＝0.95)。 (1)当最小剂量组的死亡率为0％，最大剂量组的死亡率为100％时，可按下列公式计算LD50： LD50＝lg-1[Xm-i(∑p－0.5)] (2)当最小剂量组的死亡率大于0％而又小于30％，或最大剂量组的死亡率小于100％而又大于70％时，可按下列校正公式计算LD50： LD50＝lg-1[Xm-i(∑p－)] LD50的标准误：Sx50= i 上式中，Xm为最大剂量组剂量的对数，i为相邻两组对数剂量之差值(大剂量组减小剂量组)，Pm为最大剂量组死亡率，Pn为最小剂量组死亡率，q为各组剂量存活率，n为每组动物数。 LD50的95%可信限计算公式 D50的95%可信限= lg-1(lgLD50±1.96×Sx50 ) 4、急性毒性分级评价 根据实验所得的半数致死量，参考食品毒理学经口急性毒性分级标准评价敌百虫的毒性。（见附表3） 六、注意事项 1、溶液抽取剂量要准确，灌胃针应插入胃内，确保灌胃剂量的准确性。 2、观察期间，小鼠自由采食和饮水，每两天更换一次垫料。 3、做好实验记录。 七、思考题 1、改良寇氏法对试验设计有何要求？ 2、除改良寇氏法，还有哪些方法可计算半数致死量？