海洋放線菌A34和真菌1942活性成分研究.docVIP

海洋放线菌#A34和真菌#1942活性成分研究 彭虹 王立，林永成* 中山大学化学与化学工程学院， 广州 510275 摘要 海洋环境十分独特，极端的生态环境必然赋予生存于其中的海洋微生物不同于陆生微生物的独特的遗传背景和生理性能，并使其发展出独特的代谢方式，因而为寻找海洋新型生物活性物质提供了潜在的丰富的源泉。本文阐述了海洋放线菌和海洋真菌代谢产物研究的意义和研究进展。 实验部分对放线菌#A34和真菌#1942的代谢产物进行分离鉴定，得到7个化合物，其中包括从南海真菌#1942发现，价格昂贵，有细胞毒性的sterigmatocystin，其含量高达约1g/100L ,有可能开发成为资源菌。 关键词 代谢产物 海洋放线菌 海洋真菌 一 引言 海洋，占地表总面积71%，是独特生态系统工程的微生物的生存繁衍地。由于海洋环境的特殊性和微生物独特的遗传背景，海洋微生物已发展出不同于陆地微生物的独特代谢方式，因而为寻找海洋新型生物活性物质提供了潜在的丰富的源泉。 研究海洋微生物代谢产物不仅能够从中寻找新的抗生素和抗病毒等活性物质，在维护人类健康方面有着重要意义；而且用工业发酵生产可减少污染、节约能源、降低成本、提高产量，从而实现可持续发展。 二 海洋放线菌和真菌的研究情况 2.1 海洋放线菌的研究情况 放线菌（Actinomycetes）是一大类具有分枝状菌丝体的革兰氏阳性菌，最早由Cohn（1875）由人泪腺感染病灶中分离到一株丝状病原菌——链丝菌（streptothrix）而发现的。由于Waksman（1943）和其他研究者的创造性工作，陆续放线菌的一些种中分离到氯霉素、四环素、新霉素和红霉素等。从此，放线菌作为抗生素和其他生物活性次生代谢产物的重要微生物资源而越来越受到人们的关注。目前世界药物市场上的67%的抗生素产品来自微生物，其中2/3又是放线菌所产生（Newman and Laird,1997）。 海洋放线菌代谢产物类型丰富，有内酯类、吡喃酮类、醌类、生物碱类、肽类、酰胺类等化合物。如Masashi Tsuda 等[1]从放线菌 brasiliensis IFM 0955中分离到一个新的大环内酯类抗生素，命名为Brasilibactin A，对微球菌和葡萄球菌有抑制活性(MIC 0.73 and 4.5 mg/mL, respectively)，而且对人体表皮癌细胞有很强的体外细胞毒作用(IC50, 0.04μg/mL)；Scott S. Mitchell等[2]从海洋沉积物样品分离到的链霉菌aureoverticillatus NPS 001583中发现了结构新颖的22元环内酰胺，命名为Aureover -ticillactam，对直肠癌细胞、黑素瘤、急性白血病T细胞等均有适中的EC50值。 放线菌除了是寻找和发现天然生物活性物质的重要生物资源外，也是环境污染生物治理中值得重视的重要生物类群。它们可用于降解橡胶制品，处理活性污泥，以及工业发酵生产。 2.2 海洋真菌的研究情况 海洋真菌的分布极为广泛，可从来源于海洋的不同的基质中找到,如红树林的树干、树叶、气根、海藻、海洋漂浮的木头、海水浸泡的沼泽地、死亡的珊瑚、海洋沙滩种植物、海底沉积物，海洋中各种动物的体内，体表的共生真菌等[3]。海洋真菌代谢产物类型包括杂环类、环肽类、生物碱类、肽类、酮类、萜类等化合物。如日本Sankyo研究小组[4]从海洋担子菌deuteromycete Phoma sp.分离的到phomactin A可以作为新型的血小板活化因子拮抗剂。 三 海洋放线菌#A34和真菌#1942活性成分的研究 3.1 实验试剂与仪器 葡萄糖CP，蛋白胨BR，酵母膏BR，粗海盐（微生物养殖用），其它实验用试剂均为市售AR试剂。薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的硅胶G、GF254、H、HF254，柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的200-300目硅胶及硅胶H。 核磁共振仪(Varian，INOVA-500)；红外光谱仪（Bruke，EQUINOX55-A590/3F）；显微熔点仪（北京物理光学仪器厂，X4型）；质谱仪（VG，ZAB-HS）；元素分析仪器（Elementar，Vario EL CHNS-O）。 3.2 菌种和培养基 放线菌#A34是Streptomyces sp.链霉菌属，由中山大学生命科学院从海南陵水猴岛海底沉积物中分离得到，孢子成密螺旋状，菌落正面海军蓝色，反面海涛蓝色，无色素。产抗细菌活性物质。放线菌#A34由广东省农科院植保所发酵罐培养350L。培养基为：KNO3 1g； K2HPO4 0.5g；MgSO4 0.5g；FeSO4 0.01g；可溶性淀粉 20g；海盐 40g；蒸馏水 1L；