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农杆菌叶盘转化法的操作 用打孔器从消毒叶片上取得叶圆片，在过夜培养的对数期的已构建好的农杆菌工程菌的菌液中浸数秒后，置于培养基上共培养2-3天，待菌株在叶盘周围生长至肉眼可见菌落时再转移到含有抑菌剂的培养基中除去农杆菌，与此同时该培养基中加入抗生素进行转化体筛选，经合适的培养基培养得到愈伤组织，再得到再生植株。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 农杆菌转化的优点： 1.农杆菌转化方法是一种生物转化系统，因而具有主动性。 2.通过农杆菌转化系统获得转基因植株还具有拷贝数低。转基因较少沉默以及转基因片段较长等优点。 农杆菌转化的缺点： 1.有致瘤的危险 2.不是单子叶植物的寄主。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （二）基因直接导入法 (1)DNA直接吸收到植物细胞：DNA直接吸收进入原生质体的方法分为物理法和化学法两大类。其中，物理法主要是电穿孔法，化学法主要是聚乙二醇法。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (2)显微注射法：该技术是直接将外源DNA注射进入细胞核中而不降低DNA的活力。目前它已变成直接引入外源小分子、大分子、细胞器和病毒粒子进入动植物细胞的技术。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (3)脂质体介导的DNA转移：脂质体可将核酸转移到原生质体，也可将核酸等导人具有细胞壁的完整植物细胞，但是其机制目前尚不很清楚，融合可能是一种方式。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (4)微弹轰击(粒子介导)基因转移法：是把一种高速的、携带有DNA分子的粒子射向靶细胞，它穿过细胞壁和细胞膜，释放所携带的DNA进人细胞内，在一定的条件下，可使靶细胞得到转化。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （三）花粉管通道法 花粉管通道法是将外源的DNA片段在自花授粉后的特定时期注入柱头或花柱，使外源DNA沿花粉管通道进入胚囊，转化受精卵或其前后细胞，转化率高达10%。这一方法的建立开创了整株活体转化的先例，可以应用于任何开花植物。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、植物基因转化的受体系统 选择和建立良好的植物受体系统也是基因转化成功的关键因素。植物基因转化受体系统是指用于基因转化的外植体通过细胞或组织培养途径高效、稳定地再生无性系，并能接受外源DNA整合。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1．原生质体受体系统： 植物原生质体是去除细胞壁后的“裸露”细胞，又具有全能性，能在适宜的培养条件下诱导出再生植株。可利用物理或化学方法改变细胞膜的通透性，使外源DNA进入细胞并整合到染色体上且进行表达，从而实现植物基因转化。 Eva