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组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制研究 　　[摘要] 目的 研究组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制。 方法 采用LNCaP细胞系建立前列腺癌异种移植体动物模型，分为对照组和HDAC抑制剂组，对照组动物常规饲养，HDAC抑制剂组采用0.4%HDAC抑制剂丙戊酸（VPA）饮用水连续饮用35 d。免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3、p21WAF1/CIP1、p27KIP1、细胞周期蛋白D1、雄激素受体（AR）表达。 结果 与对照组相比，HDAC抑制剂组乙酰化组蛋白H3 阳性染色MOD值显著升高[（0.63±0.12）比（0.75±0.11），P 0.05]，p21WAF1/CIP1[（0.27±0.06）比（0.79±0.10），P 0.05]和p27KIP1 [（0.31±0.08）比（1.09±0.18），P 0.05] 阳性染色MOD值显著增加，细胞周期素D1的阳性染色MOD值显著减少[（0.69±0.09）比（0.58±0.08），P 0.05]，AR阳性染色MOD值显著降低[（0.62±0.10）比（0.53±0.07），P 0.05]。 结论 HDAC参与前列腺癌细胞的细胞周期调控并与AR过表达有关，HDACI可通过诱导癌细胞周期阻滞及下调AR表达水平等机制抑制前列腺癌肿瘤移植体生长。 　　[关键词] 组蛋白去乙酰基酶；前列腺癌；丙戊酸；细胞周期；雄激素受体 　　[中图分类号] R737.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（b）-0013-03 　　前列腺癌是一种常见于老年男性的恶性肿瘤，在欧美等地发病率位居恶性肿瘤首位[1]。组蛋白修饰是组织细胞发育、分化基因转录调控的关键分子机制，组蛋白修饰状态改变在肿瘤发生及进展中具有重要作用。组蛋白修饰方式包括乙酰化、甲基化、泛素化、磷酸化修饰等[2-4]，核心组蛋白乙酰化水平的稳态是由组蛋白乙酰转移酶和组蛋白脱乙酰化酶（HDACs）之间的动态平衡调节的[5]。HDACs在许多异常活化的癌细胞中均存在，可阻抑细胞周期抑制因子的作用。组蛋白乙酰化状态失衡参与众多信号转导通路调节，是细胞癌变中重要的转录后修饰过程[6]。因此，HDAC 是重要的抗癌药物靶点，在抗癌药物研究中具有重要意义[6]。 　　丙戊酸（VPA）是一种HDAC抑制剂（HDACI）和抗癫痫药物，可抑制Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白脱乙酰基转移酶（HDACs）[7]。研究发现，长期服用VPA可减少前列腺癌症细胞的增殖[8-10]。因此，本研究观察了HDAC抑制剂VPA对在体前列腺癌移植体的作用，以期明确组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及其机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　人前列腺癌的细胞系LNCaP购自American Type Culture Collection （Manassas，VA），雄性无胸腺nu/nu小鼠（20～25 g）购自天津医科大学实验动物中心。L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基为Cellgro（Herndon，VA）公司产品，热灭活胎牛血清购自Life Technologies，Inc.（Carlsbad，CA），盐酸环丙沙星和庆大霉素购自US Biological公司（Swampscott，MA），基底胶为BD Biosciences（Palo Alto，CA）公司产品，VPA（1 mol/L的VPA钠盐； Sigma， St. Louis，MO）。 　　一抗来源：乙酰化组蛋白H3为美国Upstate公司产品，p21WAF1/CIP1及雄激素受体（AR）为美国Santa Cruz公司产品，细胞周期蛋白D1为美国Ventana Medical Systems公司产品，p27 KIP1为美国DAKO公司产品。 　　主要仪器：Leica CM 1850 冰冻切片机为德国徕卡公司产品，Olympus BX51显微镜为日本奥林巴斯公司产品。 　　1.2 肿瘤细胞株培养及移植瘤建立 　　细胞培养环境：含L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基，10%热灭活胎牛血清，5 μg/mL的盐酸环丙沙星和50 μg/mL庆大霉素。细胞生长至铺满培养基80%～90%时，用含0.05%胰蛋白酶的EDTA（0.53 mmol/L）收集细胞，细胞重悬在PBS（pH 7.4），与混合1×基底胶（BD Biosciences，Palo Alto， CA）混匀，皮下注入（1×106/次）雄性无胸腺nu/nu小鼠，建立肿瘤移植体。 　　1.3 动物分组及处理 　　移植瘤建立后，动物随机分成对照组和HDAC抑制剂组，每组6只。HDAC抑制剂VPA溶于PBS，经0.22 μm过滤器灭菌，HDAC抑制剂组受试动物接受0.4%w/v的VPA饮