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乙型肝炎病毒检测罕见模式1例 　　【摘要】采用ELISA及化学发光法检测乙型肝炎病毒五种血清标志物， 在本肝病专科实验室检测过程中， 发现一例未经报道的罕见病例模式（-++-+）， 其检测结果具有明显特殊性， 本文就此病例进行探讨， 试图讨论其机制机理， 以期引起相关专业工作者的注意， 提高检测准确性， 并为病毒基因复制的深入研究提供参考。 　　【关键词】乙肝；罕见模型；基因复制 　　乙型肝炎病毒血清标志物模式是目前肝炎病毒诊断和临床分析的重要依据， 随着乙型肝炎病毒治疗水平的不断提高， 治疗和用药的不同， 随着病毒的变异， 也使HBV血清学模式呈现了多样性， 使临床医生对HBV血清标志物报告的分析和解释越来越难， 从而影响诊疗。近期兰州市第二人民医院肝病专科实验室又发现一例为HBsAg阴性、HBsAb阳性、HBeAg阳性、HBeAb阴性、HBcAb阳性的罕见模式。与常见模式及所报道罕见模式[1]不同。 　　1 仪器及试剂 　　1. 1 仪器 美国ABI7300PCR扩增仪、采用美国ABI3130测序仪、科华ST-360酶标仪。 　　1. 2 试剂 HBV ELISA定性检测用英科新创（夏门）科技有限公司试剂盒、HBV化学发光定量检测用上海科华生物工程有限公司试剂盒、HBV核酸扩增（PCR）荧光定量检测乙肝病毒DNA用上海科华生物工程有限公司试剂盒、S区测序提取用星耀医学科技发展有限公司的HBV乙肝核酸定量检测试剂盒。 　　1. 3 方法 　　1. 3. 1 血清学检测采用ELISA法及化学发光法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五种血清学标志物。 　　1. 3. 2 HBV DNA定量检测采用HBV核酸扩增（PCR）荧光定量检测乙肝病毒DNA。 　　1. 3. 3 基因测序采用PCR结合DNA测序对HBV S区基因进行多态性检测，并应用Chromas软件进行比对和分析 　　2 结果 　　2. 1 ELISA不同时间段检测同一患者三次采血样本结果均为HBsAg阴性、HBsAb阳性、HBeAg阳性、HBeAb阴性、HBcAb阳性。化学发光法检测结果HBsAg 0.01 （ng/ml）、HBsAb 147（mIU/ml）、HBeAg 2.24 （ ncu/ml）、HBeAb0.01（ncu/ml）、HBcAb13.2 （ncu/ml）。 　　2. 2 HBV DNA检测结果2.89×106 copies/ml，为中度复制。 　　2. 3 S1区变异位点：2526T/A，2530A/C，2557A/G，2563G/A， 2572A/C， 2620G/A，2636T/A， 2680G/A，2677C/A，2683C/T，2700G/T，2713T/C，2716G/A，2766C/T，2793A/C，2876A/G，2896T/A，2942C/T，2946G/A，2950G/A，2999A/C，3000C/A. 　　S2区变异位点：160G/A，195T/C，196G/A，293C/A，356C/T， 585A/G，747C/A，723T/C，734C/T， 833G/A，839T/C，885A/G，954T/C. 　　3 结论 　　前S1区突变主要发生在后半段；前S2区nt585突变， 导致HBsAg第145 位甘氨酸被精氨酸取代，显著降低了HBsAg 的抗原性， 使之不能与单克隆抗“A”抗体及疫苗接种后抗体或恢复期血清抗体结合或者结合力下降， 从而产生免疫逃避株而感染患者。 　　4 讨论 　　HBV基因组全长约3200 bp， 是部分双链的环状DNA， 其负链核苷酸序列有4个相互重叠的开放读码框（ORF）， 分别为S、C、P和X区。HBV自身编码的DNA聚合酶具有逆转录酶功能， 可由前基因组RNA反转录合成子代病毒基因组， 但逆转录酶缺乏3-5的校对功能， 造成子代HBV基因组与模板之间存在一定的差异， 在复制过程中极易产生突变， 理论上来说，一个乙肝感染患者可以每天出现多达1010-11次突变（10-5RT突变率/bp/病毒/d×3200bpHBV基因组×1012-13病毒/d[2，3]）。HBsAg由S区基因编码， 其优势共同抗原表位“A”决定簇位于高度保守的124～147位氨基酸亲水区， 是HBV各血清亚型的共同决定簇， 在所有血清亚型中均存在。“A”决定簇借2对二硫键形成2个环状结构， 其独特的空间构象使其具有极强的抗原性， 机体产生的保护性抗体中90%以上针对“A”决定簇， 该部位氨基酸的替代造成的蛋白结构改变是HBsAg抗原性漂移产生的分子基础。抗原分子的立体结构是决定抗原与淋巴细胞抗原受体结合引起免疫应答的关键， 也是决定抗原与抗体结合出现各种免