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生物技术基础实验Ⅱ教学大纲 课程编号： 课程名称：生物技术基础实验Ⅱ 实验学时：98 一、本实验课的性质、任务与目的 本实验课程隶属省级教改重点项目，包含细胞生物学、基因工程和遗传学三大块实验教学内容。因为这三大块无论从理论知识还是从实验课内容上都有千丝万缕的联系，将三者有机的结合在一起，既可以避免教学内容的重叠，还可以优化实验内容，节省课时和耗材、药品的花费，同时系统锻炼学生，培养学生良好的动手能力。 本课程属于生物技术专业必修专业实验课，授课对象为该专业本科学生。 细胞生物学、细胞工程实验是现代生物实验技术的重要组成部分，同时也是现代生物学研究的重要技术工具。生物技术专业学生通过本课程的学习，掌握显微镜、显微摄影技术,细胞、细胞器及组分的分离,细胞骨架成分的观察，细胞成分的化学测定，染色体标本的制备与分析，细胞融合等的基本原理、技术和方法，为从事生物学领域的相关研究奠定良好的理论和技术基础。 近年来分子生物学在医药卫生、农业、环保、轻工等领域有突飞猛进的发展，分子生物学实验技术已成为生命科学及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。分子生物学是从分子水平研究基因的结构和功能的一门学科。主要研究核酸、蛋白质等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性。通过本课程训练，要求熟练掌握和详细了解DNA的结构与功能、RNA在蛋白质合成中的功能、蛋白质的结构与功能、遗传密码及基因表达调控的本质。 遗传学是研究生物遗传和变异规律、探索生命起源和生物进化机理的科学，是生物学科中十分重要的基础科学。遗传学研究的任务是阐明生物遗传和变异现象及其表现的规律；探索遗传变异的原因、物质基础及其内在规律；指导动植物和微生物的改良，提高医学水平，为人民谋福利。通过该实验的训练使学生掌握遗传学实验的基本知识、方法和技能，验证课堂理论。 本课程以学生动手操作为主，讲授为辅,教给学生细胞生物学实验的基本方法、原理、数据和图象处理、结果分析、仪器使用等，使学生不仅受到系统的训练，还使学生能够掌握一些基本的实验技能，具有阅读教材和仪器说明书的能力，同时培养学生从事科学研究工作的良好作风和工作习惯，逐步培养学生运用所学知识解决实际问题的意识和探索未知热情。要求学生课前预习，实验过程中认真操作和记录，写好每项实验总结报告，为专业课程的学习及参加科研实践打下基础。 二、本实验课所依据的课程基本理论 活体细胞在显微、亚显微、分子水平上的结构、细胞的生命活动；细胞器及组分的分离；体外培养细胞、细胞全能性、细胞融合；组织、细胞育种等。相应的《分子生物学》理论课内容。经典遗传学的三大规律，遗传的细胞学基础，遗传物质的分子基础，遗传物质的诱变及检测。 三、实验类型与要求 1、细胞生物学部分（30学时） 序号 实验名称 实验内容 实验学时 实验类型 实验要求 1 临时制片与显微成像系统操作技术 1、掌握动植物细胞的临时制片技术 2、掌握显微成像系统的操作技术 3、掌握真核细胞形态结构的显微观察技术，掌握生物绘图的方法。 3 综合型 必修 2 植物细胞骨架的观察 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方法。掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 3 验证型 必修 3 线粒体的超活染色与观察 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。学习细胞器的超活染色技术。 3 验证型 必修 4 叶绿体的分离与观察 掌握叶绿体的分离技术 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。 3 验证型 必修 5 细胞染色体的制备及有丝分裂观察 掌握有丝分裂过程中各时期的主要特点,了解有丝分裂生物学意义,掌握细胞染色体标本的制备 3 验证型 必修 6 细胞电融合方法 在了解电融合原理的基础上，学会细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。 3 验证型 必修 7 植物组培培养基和材料的制备与接种 1、MS培养基的配制与灭菌 2、组培材料的制备与消毒 3、接种 6 综合型 必修 8 愈伤组织的诱导、增殖与分化 1、愈伤组织的诱导 2、愈伤组织的增殖 3、愈伤组织的分化 6 综合型 必修 2、分子生物学部分（48学时） 序号 实验项目 目的要求 每组人数 实验时数 实验 类型 1 基因组DNA制备 1．掌握细菌基因组DNA分离纯化原理。 2．学习细菌基因组DNA提取的方法。 1 4 综合性 2 基因组DNA浓度和纯度测定 1.学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA原理。 2.掌握琼脂糖凝胶电泳的操作方法。 3．掌握定量核酸的原理和方法。 1 4 验证性 3 PCR扩增16S rDNA 1.掌握PCR扩增技术的原理。 2.学习PCR扩增目的基因的原理与方法 1 8 综合性 4 16S rDNA 纯化回收 1.学习凝胶中回