第三章 蛋白质的化学(二)课件.pptVIP

（ＨＣl中） ＤＮＰ－多肽 (2) （DNS法）丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)反应 -HCl + 氨基酸混合物 水解 多肽 多肽 DNS-氨基酸 具有荧光 (3)Edman法（异硫氰酸苯脂反应） PITC 无N-端氨基的剩余部分 用层析法分离 (4) 氨肽酶法 从多肽链的N末端依次向内切 NH2 ---aa---aa---aa---aa……. 据一定时间内释放出的AA的数量和种类来推测. C-未端的测定方法 1.肼解法 是目前最好的方法 用色谱法鉴定 多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 注:末端若为半胱氨酸、天冬酰胺、精氨酸在肼解过程中易被破坏。 CH C R1 H2N O … CH C R（n-1） O H2N CH COOH Rn NHNH2 H2N + + + NHNH2 CH C R1 H2N O N H … CH C R（n-1） O N H C O N H CH COOH Rn NH2NH2 无水 100℃ （n-1）个氨基酸酰肼 C-末端氨基酸 氨基酸酰肼可与苯甲醛反应生成沉淀，与C-末端氨基酸分离 3.LiBH4还原法 多肽+ LiBH4 水解 α-氨基醇+ n氨基酸 含C—端氨基酸,用层析法鉴定 2. 羧肽酶的方法 是目前最有效也是最常用的方法。 羧肽酶是一类肽链外切酶，它专一地从肽链的C－端依次切下一个氨基酸残基，释放出游离的氨基酸。据一定时间内切下的数量来测氨基酸的数量。 酶解法：如胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 化学法：如溴化氰法 羟胺法 5、裂解多肽链成较小的片段 胰蛋白酶 R1=Lys和Arg侧链(即Lys和Arg的羧基参与形成的肽键)（专一性较强，水解速度快）。 R2=Pro时抑制水解 糜蛋白酶 或称胰凝乳蛋白酶： R1=Phe,Trp,Tyr时水解快; R1= Leu，Met和His水解稍慢。 R2=Pro时抑制水解 胃蛋白酶 R1和R2＝Phe, Trp, Tyr; Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度较快。 R1=Pro 水解受抑 最适PH=2 嗜热菌蛋白酶 R2=Phe, Trp, Tyr; Leu，Ile, Met以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快。 R2=Pro或Gly 水解受抑。 R1或R3=Pro 水解受抑。 化学法：可获得较大的肽段 溴化氰水解法：它能选择性地切割由甲硫氨酸（Met）的羧基所形成的肽键。 羟胺（NH2OH）：专一性断裂-Asn-Gly-之间的肽键。也能部分裂解-Asn-Leu-之间的肽键以及-Asn-Ala-之间的肽键。 * * 第三章 蛋白质的化学(二) 海洋学院制药工程系 齐兴柱 蛋白质的结构 蛋白质结构是通过四种水平描述的：一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。 一级结构 -Ala-Glu-Val-Thr-Asp-Pro-Gly- 二级结构 四级结构 三级结构 蛋白质结构的主要层次 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 超二级结构 结构域 一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 超二级结构和结构域 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure) 高级结构 说明： 1.实际上在二级结构和三级结构之间还有超二级结构和结构域2个结构层次。 2.不是所有蛋白质都有四级结构 3. 二、三、四级结构都是空间立体结构 4.蛋白质越复杂，其空间立体结构也越复杂 第一节 蛋白质的一级结构（Primary structure） (一).定义：蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序,又称为共价结构或基本化学结构。 维持蛋白质一级结构的作用力，即主要的化学键有： 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。 二硫键：由多肽链2个半胱氨酸残基的侧链的-SH基之间形成 CH C CH2 N O … H … S S CH C CH2 N O … H … CH C CH2 N O … H … SH SH CH C CH2 N O … H … （二）肽键与肽链 1.肽键（酰胺键）：一个氨基酸的α-COOH 和相邻的另一个氨基酸的α-NH2脱水形成共价键。如下图： CH COOH + R1 H2N CH COOH R2 H2N CH C R1 H2N O CH COOH R2 N H H2O H2O 肽键和