细胞工程（制药）实验指导.docVIP

绪 论 1. 实验教学目的 通过实验操作及结果观察统计，使学生在实验操作上掌握细胞工程技术中的核心，无菌操作技术以及通过一定的实验技巧控制培养的技术。同时，通过实验观察、结果分析使学生初步学会本领域的实验设计、实验分析及其完整实验报告的撰写。 实验室规则 实验室自觉遵守实验室纪律，保持室内安静。 实验过程中要听从教师指导，认真按实验步骤和操作规程进行实验。 实验台面、称量台、药品架、水池及各种实验仪器必须保持清洁。 配置试剂和无离子水的使用要注意节省。 配置的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱中的样品，必须贴上标签，写上品名、浓度、姓名和日期。 使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。 实验室内严禁吸烟、饮水和进食。严禁用嘴吸移液管。 实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，保证实验台面和实验柜内的清洁。 烘箱等电器用毕必须立即断电，不得过夜使用。 要严格遵守各项实验室规则，注意自我安全防护（火、爆炸、中毒、外伤、触电等）。 每日实验完毕，值日生要认真做好实验室卫生工作。最后离开实验室的人员必须关好水、电、门、窗。 实验记录与报告要求 实验记录 每位同学应备一个实验记录本，在实验中及时客观准确地记录所观察到的现象和测量的数据。实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。记录应该条理清晰，字迹端正。 3.2 实验报告 由于选开实验是连贯综合性的，所以要求将全部实验内容以一篇科技论文 3.2.1 基本要求字数不少于000字；参考文献不少于篇。文字流畅，逻辑性强；注意应用科学语言进行协作，避免口语化描述；对于所涉及的科学概念与术语力求准确、严谨。 2.2 格式要求 按理科学术论文发表格式撰写。 2.3 具体要求 A. 前言部分应对细胞工程的整体情况进行必要的综述； B. 材料与方法部分要求详细叙述实验过程； C. 结果分析部分，要求实事求是对本人实验结果进行清晰的叙述，实验失败的必须详细分析可能的原因；实验结果涉及到数据的内容必须准确、不得使用大概、约多少等不确定词；能够用本课程的理论原理对实验结果进行分析讨论；并能够将相关学科的知识应用于结果分析中。1.1 培养基母液配制1.1.1 实验目的 了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类 初步掌握培养基母液配制方法 1.2 实验原理 在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。 1.3 实验用品 1.3.1 用具器材 电子天平（感量0.001g）、粗天平（感量0.5g）、冰箱、烧杯（1000mL、400mL、100mL、 50mL）、量筒（1000mL、100mL、50mL）、试剂瓶（1000mL、250mL、150mL）、药勺、玻璃棒 1.3.2 药品试剂 蒸馏水或去离子水、1M HCl、1M NaOH、95%酒精、各种所需化学药品（分析纯） 1.4 实验内容 参照表1配制MS培养基母液 MS分组（浓缩倍数） 成 分 1L母液用量（mg/L） 每升培养基用量（mL） I (50×) NH4NO3 82500 20 KNO3 95000 MgSO4·7H2O 18500 KH2PO4 8500 II (50×) CaCl2　 22000 20 III (100×) KI 83 10 H3BO3 620 MnSO4·1H2O 2230 ZnSO4·7H2O 860 Na2MoO4·2H2O 25 CuSO4·5H2O 2.5 CoCl2·6H2O 2.5 IV (100×) Na2EDTA·2H2O 3730 10 FeSO4·7H2O 2780 V (100×) 肌醇 10000 10 烟酸 50 维生素B1 10 维生素B6 50 甘氨酸 200 1.1.4.1 无机大量元素母液的配制 包括MS组分I 和 II。 参照表1按母液配方的需要量，将各种化合物分别用粗天平称取，并分别用200mL蒸馏水溶解于500mL烧杯中，如溶解速度慢，可稍加热。在1000mL烧杯中，按表1顺序依次混合已溶化合物溶液并搅拌，以免产生沉淀，用量筒定容至1000mL，倒入试剂瓶中并贴好标签（写清MS分组名称，配制日期）。保存于冰箱冷藏室待用。 1.4.2 无机微量元素母液（MS组分III）配制 用电子天平分别称取25mg CuSO4·5H2O25mg CoCl2·6H2O并分别溶解