昆明地区禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查.docVIP

昆明地区禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查 　　摘要 网状内皮组织增生症的危害日益严重，成为养殖业的又一大危害，主要导致免疫抑制、生长抑制、采食抑制。为了了解昆明地区（安宁）是否存在该病，该试验采集了昆明地区（安宁）几个肉鸡场的鸡血清，用酶联免疫法（ELISA）对采集的100份样本进行了鸡网状内皮组织增生症病毒抗体的检测，结果表明：昆明地区（安宁）的肉鸡场目前还没有该病的存在，尽管如此也应该引起足够的重视，做好此病的预防工作，保证昆明地区肉鸡业的健康发展，保证养殖户的养殖效益。 　　关键词 鸡网状内皮组织增生症；血清流行病学；云南昆明 　　中图分类号 S858.31 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）04-0274-01 　　网状内皮组织增生症是由网状内皮组织增生症病毒引起的一群病理学综合征，包括矮小综合、淋巴组织及其他组织的慢性肿瘤以及急性网状细胞肿瘤[1]。由于该病毒所引起的肿瘤以网状内皮组织增生为特征，将其称为“网状内皮组织增生症”。网状内皮组织增生症可以引起火鸡、鸡、鸭、鹅等禽类的自然感染，其典型症状是引起火鸡等禽类的急性致死性网状细胞瘤、慢性淋巴细胞瘤以及一种以法氏囊和胸腺发生萎缩、羽毛发育异常为主要特征的矮小综合征。禽网状内皮组织增生症是禽类重要的致瘤性和免疫抑制性疾病之一。近年来，该病在全球迅速蔓延，在我国也呈逐步升高的趋势，对养禽业的直接和间接危害日趋严重。 　　网状内皮组织增生症在鸡群中已经形成一定的流行趋势，近年来国内外逐渐重视对该病的研究，虽然我国许多地区已有该病流行的报道，但是目前云南省昆明地区还尚没有文献报道，为了了解昆明地区该病的发生情况，该试验采用酶联免疫吸附（ELISA）方法对在安宁所采的鸡血清样进行了REV抗体检测，初步查明昆明地区（安宁）是否有该病的存在，并探索可行的防治方法，保证昆明地区养殖业的健康发展。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 被检血清来源。于2012年3月20日至4月2日，从安宁几个肉鸡养殖场采集血清样品，共计100份，置于37 ℃温箱1 h，让其自然分层，未能分层的用3 000 r/min离心机室温离心10 min，取上清液，置于-20 ℃冰箱中冻存待检。 　　1.1.2 主要仪器材料。酶标仪、离心管、高速离心机、低温冰箱、移液枪、注射器及针头、棉球、酒精由动物医学实验教学中心预防兽医学实验室提供。 　　1.1.3 检测试剂盒。鸡网状内皮组织增生症病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），购于北京爱德士元亨生物科技有限公司。 　　1.2 试验方法 　　在检测前用稀释液将血清样品稀释500倍，将试剂盒和鸡血清放置于室温条件下。取出包被板，记录样品位置。加入100 μL不用稀释的阴性对照血清，每次检测加2个孔。加入100 μL不用稀释的阳性对照血清，每次检测加2个孔。加入100 μL稀释好的样品至相应的孔内。至室温（18～25 ℃）孵育30 min。用350 μL的蒸馏水洗涤微孔5次，洗涤后将孔内的液体完全吸干。每孔内加入100 μL酶标羊抗鸡抗体（HRPO）。至室温（18～25 ℃）孵育30 min。用350 μL的蒸馏水洗涤微孔5次，洗涤后将孔内的液体完全吸干。每孔加入100 μL TMB底物溶液。至室温（18～25 ℃）孵育15 min。每孔加入100 μL终止液终止反应。在650 nm处测量和记录吸光值 A（650）。 　　1.3 结果判定 　　按照说明书，只有在阳性对照孔所得均值减去阴性对照孔所得均值0.075时，阴性对照孔均值0.5时为阳性，0.5时为阴性。 　　2 结果与分析 　　用ELISA方法所检测的100份血清样品中，结果全部为阴性，检测结果见表1。 　　3 结论与讨论 　　（1）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbenta-ssay，ELISA）是目前发展最快、应用最广泛的一种免疫学检测技术。其基本过程是将抗原或抗体吸附于固相载体上，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后以肉眼或酶标仪检测结果。通过酶与底物作用呈现颜色的深度进行定量或定性分析。该试验将抗原抗体反应的特异性与酶的高催化活性相结合，使测定方法达到很高的敏感性，且特异性强，可用于生物活性物质的微量检测及疾病诊断，广泛应用于整个生命科学领域[2]。该试验采用间接ELISA方法进行抗体检测，使用方法得当。 　　（2）试验结果显示，所采集的100份血清样品均没有检出抗体，说明昆明地区没有网状内皮组织增生症流行或所采样品量不够，有待进一步检测。近年来，世界各地不断有REV流行的报道，调查表明，韩国[3]和埃及[4]有34%～75%的鸡群有REV抗体。近年来，我国各地有关鸡群REV感染的报道时