实验四--食品中大肠菌群的测定论述.ppt

实验四 食品中大肠菌群的测定 一、实验目的 掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判别食品的卫生质量 了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义 二、实验原理 大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。 最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。 食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。 三、实验器材 （一）培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基 （二）实验材料 市售饮料 （三）其他 三角瓶，试管，培养皿，移液管 （四）仪器 超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅 四、实验准备 （一）配制培养基和试剂（以中央台为单位） 1、配制生理盐水：1000mL NaCl 8.5g 水 1000mL 分装： 3个三角瓶（含玻珠）中，225mL/个 9支试管，3支/组，9mL/支 灭菌： 121~126℃灭菌20min 2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL 分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min 胰蛋白胨 6g NaCl 1.5g 乳糖 1.5g K2HPO4 0.825g KH2PO4 0.825g 十二烷基硫酸钠 0.03g 水 300mL pH 6.8 3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL 分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎，112~115℃灭菌30min 蛋白胨 1.5g 乳糖 1.5g 牛胆粉溶液 30mL 0.1%煌绿水溶液 2mL 水 150mL pH 7.2 牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5 BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆粉溶液30mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。 （二）其它器具（每个组准备） 移液管 10mL 1支/组 1mL 10支/组 五、实验步骤 1、样品处理： 以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品 2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4 3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管中，每个稀释度做3个平行（共9管）。 4、37℃培养48h 5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。如有气泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则是大肠阴性管（-） 6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB试管。 7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡，则记为大肠阳性管（+）；如无气泡，则记为大肠阴性管（-）。 大肠菌群计数检验流程 0 将产气的试管内样品接种到BGLB肉汤 LST不产气（-）? 小导管里无气泡 ?LST产气（+） 9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报告样品中大肠菌群MPN值。 阳性管数 MPN 95%可信限 0.10 0.01 0.001 下限 上限 0 0 0 3.0 - 9.5 0 0 1 3.0 0.15 9.6 1 0 0 3.6 0.17 18 3 3