紫外可见分光光度计原理、使用及维护.pptVIP

黔西煤化工分析化验中心 黔西煤化工分析化验中心 紫外可见分光光度计 知识介绍、使用及日常维护 主讲： 主要内容 1、分光光度法概述 2、分光光度计的特点和结构 3、分光光度法测定时需要考虑的因素 4、紫外可见分光光度计主要部件介绍 5、紫外分光光度计测样不稳定和不准确的原因 6、紫外分光光度计常见的非仪器问题 7、钨灯和氘灯的更换 8、日常维护 一、吸收光光度法概述 1、吸收光度法概念：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸收光度法。 2、吸收光谱的分类 3、吸收光度法的理论基础和适用范围 1）吸收光度法的理论基础： 朗伯比尔定律：A=kbc， 朗伯定律是说明光的吸光度与吸收层厚度成正比；比尔定律说明光的吸光度与溶液浓度成正比。 2）朗伯比尔定律适用范围：朗伯定律对于各种有色溶液都适用，比尔定律只有在一定浓度范围内使用，吸光度A和浓度才成直线关系，它只适用于浓度小于0.01mol/L的稀溶液。 二、分光光度计的特点及结构 1、特点： a、与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快； b、灵敏度高； c、选择性好，有最大吸收波长。 d、精密度和准确度较高; e、用途广泛。 2、结构 1）光源（氘灯、钨灯）→2）单色器 （光栅）→3）吸收池→4）检测器→ ↑样品 5）信号显示系统 三、分光光度法测定时需要考虑的因素 1、反应条件的选择 1)显色剂的用量； 2)溶液酸度； 3)溶液温度； 4)显色时间； 5)溶剂，比如有机溶剂常能降低有色化合物的分离度，从而提高显色反应的灵敏度。 2、显色反应时应注意共存离子的干扰 消除办法： 1)、控制溶液酸度； 2)、加入掩蔽剂； 3)、选择适当的参比溶液； 4)、选择适当的波长； 5)、利用氧化还原反应； 6)、采用适当的分离方法； 7)、利用导数光谱法、双波长等新技术。 3、参比溶液的选择 用参比溶液调节分光光度计的吸光度为0，然后测定试样溶液或者标准溶液的吸光度值，参比溶液的作用除了消除吸收池壁对入射光的放射和散射等影响外，合理选用时还可以消除其他干扰，使测得的吸光度正确反映被测物的浓度，提高测定的准确性。 4、测定条件的选择 1）吸收波长；一般选择最大吸收波长处。 2）吸光度范围，一般来说，吸光度在0.2～0.8时，浓度测量的误差最小，这就是适宜的吸光度范围，解决办法：a 调节溶液浓度如减少或者增加取样量，改变稀释倍数；b 使用厚度不同的吸收池比如提高或者减少吸收池的厚度，需要重新作校正曲线； 3）狭缝宽度的选择，狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线性范围，狭缝宽度太大，灵敏度下降，工作曲线线性范围变窄，反之，相反。 四、紫外可见分光光度计主要部件介绍 光源： 紫外可见分光光度计的辐射源有两类：热辐射光源和气体放电光源。 热辐射光源如钨灯和卤钨灯，可用于可见光区；气体放电光源如如氢灯和氘灯，主要用于紫外光区。 主要部件 光源 绝大多数紫外分光光度计主要使用钨灯和氘灯作为辐射光源，钨灯的波长范围在350～2500nm，主要用于可见光区的光源； 氘灯的波长范围在180～460nm之间，主要用于紫外光区的光源。 如果测定波长在180～400nm之间，应选择氘灯作为辐射光源，如果波长在400nm以上应选择钨灯作为辐射光源，关闭不用的光源。 主要部件 吸收池 吸收池材质：吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分 为玻璃吸收池和石英吸收池。 切记：玻璃比色皿不能用于紫外区！ 区分方法:可用仪器实测紫外区200nm波长处的吸光度值。 主要部件 吸收池 因比色皿的使用不当易导致数据重复性差。 原因：角度、位置变化、表面洁净度、污染程度 注意：粘接的比色皿不适合装浓硫酸、不适合用高于25瓦的超声波机清洗。 主要部件 吸收池 吸收池的污染和清洗 ： 1）比色皿沾污会直接严重影响分析测试的结果！这个非常重要，在日常的分析工作中，往往不大重视比色皿的沾污问题。 2）、污染清洗方法： a、如果肉眼观察有污点，就应清除掉；可用高级擦镜纸、软的黄鼠狼毛笔等柔软的物质擦洗； b、也可用洗液清洗；常用洗液：盐酸-水-甲醇（1:3：4体积比）或者铬酸洗液，彻底清洗吸收池或者其他玻璃器皿。了解内容：铬酸洗液的配制方法：20g的K2Cr2O7，溶于40mL水中,将浓H2SO4 360mL徐