动物细胞培养和核移植技术(上课用的)要点.pptVIP

李国城 一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1、概念： 2、原理： 细胞增殖 一、动物细胞培养 阅读“动物细胞培养过程”并思考： 1、简述动物细胞培养的操作过程 2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ 为什么？ 动物细胞培养过程 3、动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 动物组织细胞间隙中含有一定量的纤维蛋白，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 （水解纤维蛋白） 使组织细胞分散开的目的：①能保证细胞所需要的营养供应；②有利于细胞内有害代谢产物的及时排出 传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群 传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群 4、结果：动物细胞培养最终不形成生物体 （3）能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ （1）动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 不能，因为动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（pH=2.0）没有活性。 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，分裂能力强，容易培养 探究 （2）如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 （4）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 （5）什么叫细胞贴壁和接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上的现象，称为细胞贴壁。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 探究 接触抑制 （6）什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？ 原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养 进行传代培养的原因： 接触抑制 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 遗传物质改变 5、动物细胞培养条件： ①无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） ②营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） ③温度和pH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4 ④气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 提供有利于细胞生长增殖的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等 6、动物细胞培养的应用 ①获得细胞产物，如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 ②用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 ③用于生理、病理、药理等方面的研究 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基 类型 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 植物组织培养和动物细胞培养的比较 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞分泌蛋白 C母绵羊子宫 多莉羊的培育过程 二、动物体细胞核移植技术 和克隆动物 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中。使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。（克隆动物） 1、动物核移植： 2、分类 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？ 保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。 1、受体细胞为什么选用卵母细胞？ 卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性所需的物质和营养条件。 3、体细胞核移植的过程 供体细胞 （供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵 母细胞 注入 细胞 融合 重组细胞 构建重组 胚胎 胚胎 移植 代孕 母体 生出与供体遗传基础相同的个体 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性所需的物质和营养条件。 １、核在进