参考资料--hcy生产工艺研究.docVIP

同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法） 主要生产工艺及反应体系的研究资料 设计思想：同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）原理为样本中的同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。 同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）(主要是试剂配方)的研制、试剂盒组成的研制、试剂盒反应体系的建立。 产品拟定标准： 准 确 度： 以本公司制备的质控品为检测样本时，测定值相对偏差R≤20%; 线 性 范 围： Hcy试剂在拟定线性范围内，回归系数r应不小于0.990; 分析灵敏度： Hcy含量为10umol/L时，测定吸光度变化率(减掉试剂空白吸 光度变化率) △A ≥0.002Abs/min 测量精密度： 用质控品重复测定10次，测试所得的结果，变异系数CV≤10% 1．主要生产工艺描述及确定依据 1.1试剂配方的确定依据 由于生化试剂的特殊性，试剂处方的确定依据主要来源： Pastore Aet al. Fully automated assay for total homocysteine, cysteine, cysteinylglycine, glutathione, cysteamine, and 2-mercaptopropionylalycine in plasm and urine. Clin. Chem, 1998,44(4) :825-829 1.2试剂配方的研制 根据产品的性质，将试剂设计为双试剂。其中R1主要成分为tris缓冲液，S-腺苷甲硫氨酸盐、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性、三（2羧乙基）磷氯化氢、α- 酮戊二酸、修饰化Hcy甲基转移酶、谷氨酸脱氢酶，R2tris缓冲液、修饰化S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶、腺苷脱氨酶 1.2.1基础配方的研制 1.2.1.1实验方案：根据正交实验的原则，设计具体方案如下: R1试剂： ph7.5 配方一：tris缓冲液 100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM） 0.2mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH） 0.3mmol/L 三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP） 0.7mmol/L α－酮戊二酸 4.0mmol/L 修饰化Hcy甲基转移（HMTase） 3.0KU/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH） 5.0KU/L 配方二：tris缓冲液 100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM） 0.3mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH） 0.1mmol/L 三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP） 0.6mmol/L α－酮戊二酸 5.0mmol/L 修饰化Hcy甲基转移（HMTase） 4.0KU/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH） 10.0KU/L 配方三：tris缓冲液 100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM） 0.1mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH） 0.2mmol/L 三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP） 0.5mmol/L α－酮戊二酸 5.0mmol/L 修饰化Hcy甲基转移酶（HMTase） 5.0KU/L 谷氨酸脱氢酶（GLDH） 10.0KU/L 配方四：tris缓冲液 100mmol/L S-腺苷甲硫氨酸盐（