Chapter4色谱分离技术(2015年).ppt

;;1.概 述;茨维特实验;1.概 述;1.概 述;色谱法分离过程;1.概 述;1.概 述;1.概 述;1.概 述; 液相层析; 凝胶层析，又称为凝胶过滤、分子排阻层析或分子筛层析。是以各种凝胶为固定相，利用流动相中所含各物质的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。 特点：设备简单、操作方便、重复性好和样品回收率高等。;凝胶三维空间网状结构。;2.凝胶过滤层析;凝胶过滤层析示意图;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;the shape of your peak(峰形);2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;凝胶颗粒;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;品 名;2.凝胶过滤层析;常见的凝胶;2.凝胶过滤层析;Superdex Superdex是由高交联度多孔琼脂糖与葡聚糖共价结合而成的。该凝胶具有良好的分子筛特性和物理、化学稳定性。在用其分离样品过程中，溶液的酸碱度可在pH3~12范围内变化，溶液中加入去污剂(如1％SDS)和(或)解离剂(如8mol／L尿素、6mol／L盐酸胍)时，也不会影响分离效果。;2.凝胶过滤层析;粒度的选择： 凝胶的粒度有粗有细(与交联度无关)，细颗粒凝胶之间空间小，装柱易均一，因此分离效果较粗得好； 颗粒小，分辨率高，但相对流速慢，实验时间长，有时会造成扩散现象严重；颗粒大，流速快，分辨率较低但条件得当也可以得到满意的结果；刚性好，适合生产。 稳定性的选择 是否受pH、温度、去污剂及有机溶剂影响等。;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;2.凝胶过滤层析;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;羟基磷灰石;羟基磷灰石;羟基磷灰石;氧化铝;硅胶（Silica gel; Silica）;3.吸附和离子交换色谱;;3.吸附和离子交换色谱;薄层层析 Thin layer chromatography ,TLC;薄层层析常用的基质;薄层板的制作;展开剂的选择;点样;常用的点样方式;展开;定位与显色; 展开后，薄层分离所得斑点中化合物可进一步定量，其测定方法可分为两大类： 一类为洗脱测定法，将所需测定的斑点中的组分用适当溶剂洗脱，再选用适当方法定量； 另一类为直接测定法，色谱分离后，直接用肉眼观察比较或用仪器扫描斑点而测定其含量。 ;3.吸附和离子交换色谱;装柱;装柱;平衡与上样;洗脱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;离子交换树脂;离子交换树脂;交换容量：单位质量（体积）的干胶所能交换离子的量，反应离子交换树脂进行离子交换反应的性能。有总交换容量、工作交换容量和再生交换容量三种表示方法。;离子交换树脂;离子交换树脂;离子交换树脂;;离子交换树脂;多糖基质;多糖基质;多糖基质;3.吸附和离子交换色谱;阳离子交换剂;阴离子交换剂;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱;3.吸附和离子交换色谱; Packing(装柱) ; Equilibration（平衡）;;Selectivity and pH; Equilibration（平衡）; Sample application（上样）; Elution（洗脱）; Elution（洗脱）; Elution（洗脱）; 洗脱注意事项; Wash（清洗）; Wash（清洗）;3.吸附和离子交换色谱;To ensure a proper pH value, the sample should be dissolved in start buffer (A), critical with large volume samples Buffering ion concentrations of 20–50 mM are usually sufficient;4.51800 cm/h 4.98 ml/min;4.疏水作用层析;4.疏水作用层析;amino acid;蛋白质在HIC中的层析行为不仅取决于分子表面疏水区的大小和疏水性