甘草多糖.docVIP

 PAGE 12 甘草多糖制备工艺研究 专业名称：生物工程 学号： 姓名： 指导教师： 职称： 教授 研究背景介绍 甘草，系豆科多年生草本植物。甘草表面红棕色或灰棕色，具显著的纵皱纹、沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射状，有的有裂隙。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。 甘草是临床最常应用的药品。生甘草能清热解毒，润肺止咳，调和诸药性；炙甘草能补脾益气，临床用量特大，出口量大(刘霞，谢建新等.2004) 。除药用之外，食品上也大量用甘草做糕点添加剂，它的甜度是HYPERLINK /doc/3826585.html蔗糖的百倍。西方国家大量进口甘草，从中提取甘草次酸，治HYPERLINK /doc/5332914.html艾滋病。甘草退耕还林，水土保持作用更强。陕北农民和西部人们反映，把甘草种子随便撤到地上即可出苗，抗旱性特强。糖类物质是地球上数量最多的一类有机化合物，是生命物质的组成成分之一。糖类物质广泛地存在于生物界，特别是植物界。糖类物质按干重计占植物的83％～90％，占细菌的10％～30％，动物的小于2％。大量药理及临床研究证实：多糖有调节免疫、抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂等生理功能，可广泛应用于医药、保健品及功能食品，作为绿色生物医药产品具有广阔的市场前景（朱晓霞，罗学刚．2007） 。 多糖又称多聚糖。其存在于动物、高等植物、微生物(细菌和真菌)及海藻等机体中。多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能，可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，如多糖能治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫系统疾病，甚至能抗AIDS病毒(陈家童．1998) ；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂作用；促进核酸与蛋白质的生物合成作用；能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，而且多糖作为药物其毒性极小，因而多糖的研究已引起人们的极大兴趣。尽管我国对多糖的研究起步较晚，但近十几年来的工作取得了较大的进展，愈来多的多糖被发现，并证实它们具有广泛的生物活性（叶凯贞，黎碧娜 等．2004）。 多糖是自然界中含量最丰富的聚合物。长期以来,多糖类有效成分重视不够,在天然生物活性成分研究中往往当作杂质被除去。近20 年来,发现多糖具有抗肿瘤和提高免疫作用, 成为国内外研究的一个热点。 多糖具有多种生物活性, 是一种天然的功能性成分。它在食品中的应用十分广泛, 可以用于抑制脂类氧化和稳定酸性饮料中的蛋白质, 并可以作为食品中的乳化成分（尹艳, 高文宏, 于淑娟 .2007） 。 研究意义 目前多糖产品开发相当热门，也卓有成效。多糖的生理功能与其纯度和化学结构有着重要的关系，多糖的提取纯化是其研究的基础。因此科学高效地从动植物及微生物中提取、纯化其中的多糖成分是目前的核心问题, 本实验则对甘草的提取与纯化进行研究，以获得较高提取率的甘草多糖，为甘草多糖的应用研究提供依据。 摘要 ：采用水提醇沉法提取甘草中的多糖,通过DEAE纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶过滤柱层析分离纯化，用苯酚-硫酸法测甘草多糖的含量，计算其提取率。 关键词：甘草 多糖 提取 纯化 层析 立论依据 1. 了解甘草多糖的提取与纯化方法 2．学会用苯酚-硫酸法测甘草多糖的含量 3. 掌握DEAE纤维素柱层析纯化方法和SephadexG-100凝胶过滤柱层析分离方法 实施路线 1 实验材料与方法 1.1 实验材料与试剂 甘草 无水乙醇 苯酚 浓硫酸 氯仿 正丁醇 葡糖糖 丙酮 乙醚 蒸馏水 考马斯亮蓝G-250 牛血清白蛋白 磷酸 氯化钠 氢氧化钠 盐酸 SephadexG-100 1.2 实验仪器 电子天平 恒温水浴锅 高速台式离心机 旋转蒸发器 真空冷冻干燥机 紫外分光光度计 层析柱 微孔过滤器 微孔滤膜 恒流泵 1.3 实验方法 1.3.1 提取工艺 称取干甘草（200g）→粉碎→热水浸提(80℃,料液比1:10,1h) →过滤（过滤时用8层纱布）→上清液放置过夜→倾出上清液→浓缩→4倍的95%乙醇沉淀→沉淀物加少量水溶解→加等体积sevage试剂（氯仿：正丁醇4:1）混合震荡(30min)→离心分离上清液,4℃,5000r,10min→4倍的95%乙醇沉淀→静置过夜(24h)→沉淀物→无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤→真空冷冻干燥得甘草粗多糖（24h） 1.3.2 甘草中多糖含量的测定 苯酚溶液的制备：取苯酚溶液5g加蒸馏水至100mL，置于棕色瓶中放冰箱备用。 苯酚-硫酸法（王晓