化学发光磁酶免疫概述.pptVIP

化学发光磁酶免疫; 上世纪60年代出现的放射免疫分析法是近代分析检测领域的一场革命，该法灵敏度和准确度高、特异性强，在相当长的一段时间内被广泛采用。但这种方法也存在以下一些缺点: 1.由于采用具有放射性危害的I125为示踪物，在试剂的制造、应用和操作过程中，会对人体造成严重的伤害及对环境产生难以处理的污染。 2.由于放射性同位素的危害，国家对医院开展放免分析方法作出了严格的限制和规定，制约了临床诊断医学的发展。 3.由于放射性同位素半衰期的限制，决定了放射免疫分析试剂的有效期只有1~2个月。给试剂的制造、运输、用户的使用带来极大不便。;化学发光免疫分析（Chemiluminescent immunoassay,CLIA）是在上世纪70年代末由Halmann和Velan首先提出。该法与其他免疫分析方法如放射免疫分析法、荧光免疫分析法、酶免疫分析法相比，具有特异性好、敏感性高、线性???围宽和仪器设备要求简单等优点。化学发光免疫分析法作为一种非放射性标记的检测技术，克服了放射免疫分析中放射性污染的问题，发光试剂无毒无害，对操作人员不会造成健康侵害，试剂保存周期长。;现在临床上使用较多的酶免疫分析法比较，因为酶免疫分析所使用的是显色底物，它所检测的吸光度值遵循朗伯-比尔定律，从而使检测标准曲线的线性范围较窄，灵敏度也比较低，而化学发光免疫分析法却无此限制，因此可以具备更宽的线性范围。;一、化学发光的原理;;（一）辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析;1．鲁米诺及其衍生物 ;;（二） 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析;该分析系统以碱性磷酸酶标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15~ 60min内光强度保持相对稳定。;磁性生物材料以其稳定的化学性质、功能化方便、可磁性富集分离及良好的生物相容性等特性，引起了人们的广泛重视和竞相研究，并被迅速引入生命科学领域的研究中。通常磁球与双手臂偶联剂的一端结合，偶联剂的另一端结合抗体，所形成的免疫磁球可用于捕获相应的抗原，利用磁性分离器可方便地对所形成的复合物富集分离，在通过合适的检测手段来检测待测物质，现在此项技术已被应用于很多分析方法当中。;; 1、表面修饰方便， 2、生物相容性好 3、良好的顺磁性 免疫磁球表面的抗体可特异性极强地捕获相应待测物质（如细菌，抗原蛋白），这样磁性微球就变味具有生物活性的磁性材料（免疫磁球）。利用免疫磁球磁性内核的磁响应性，在外加磁场的作用下可方便地与其他杂质成分迅速分离，这样可以使分析检测过程变得简单和更易操作，因此免疫磁球是一种非常有前途的分析手段。 ;当免疫磁球被引入到定量分析方法中后，对分析方法的发展起了很大的推动作用。与目前常规使用的微孔板包被法相比，免疫磁球分析方法具有以下显著优点: （1）更好的选择性。 1、相对于微孔板，免疫磁球有着大的多的活性比表面积，能提供更多的结合位点。 2、可以在溶液中较为均一的分散，其表面所结合抗体的反应位点在溶液中充分暴露，从而显著减小抗原-抗体反应的空间位阻，有利于抗体与待检物质特异性结合，从而极大提高分析方法的选择性。;（2）更快的反应速度，更高的灵敏度和检测区间 微孔板包被法中，靶物质通过分子布朗运动和扩散运动到微孔板的速度较慢，而免疫磁球可均匀分布在样品溶液中，更易于接近靶物质，从而加快抗体与靶物质的结合速度，另外化学发光底物比传统的TMB显色底物有着更高的灵敏度和具备更宽的线性范围。 ;（3）易于分离和清洗 其具有良好的超顺磁性，容易被外加磁场所吸附，吸附后的磁球可以简便地与样品溶液分离。由于免疫磁球可以利用磁性分离器方便地对所形成的复合物富集分离，使得洗涤结果更彻底、干扰物浓度极大降低和靶物质浓度有效富集，进而提高分析方法的信噪比和灵敏度。; 化学发光磁酶免疫法综合了磁性分离技术简便，化学发光法灵敏度高、线性范围广、测定速度快，以及免疫法的特异性、准确性好的优点。该法与分光光度法比较具有样品用量少，仪器操作简便，检测限下降了一个数量级。;三、化学发光磁酶免疫法的应用前景