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(1)过程①所示获取目的基因的方法是 。 (2)细菌是理想的受体细胞,这是因为它 。 (3)质粒A与目的基因结合时,首先需要用 酶将质粒切开“缺口”,然后用 酶将质粒与目的基因“缝合”起来。 (4)若将细菌B先接种在含有 的培养基上能生长,说明该细菌中已经导入外源质粒,但不能说明外源质粒是否成功插入目的基因;若将细菌B再重新接种在含有 的培养基上不能生长,则说明细菌B中已经导入了插入目的基因的重组质粒。 (5)检测工程菌中的生长激素基因是否转录出mRNA和是否翻译出生长激素,可采用的技术分别是 、 。 【解析】(1)图中过程①是以RNA为模板,通过逆转录法获取目的基因。(2)细菌具有繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少等优点,因此是基因工程中的理想的受体细胞。(3)构建基因表达载体时,需先用限制酶分别切割目的基因和载体,再用DNA连接酶将两者连接起来。(4)质粒A和重组质粒中都有完整的抗氨苄青霉素基因,因此细菌有氨苄青霉素抗性说明该细菌中已经导入外源质粒,但不能说明外源质粒是否成功插入目的基因;重组质粒中四环素抗性基因内插入了目的基因,不能表达,因此细菌对四环素无抗性则说明细菌B中已经导入了插入目的基因的重组质粒。(5)检测mRNA和生长激素(蛋白质)的技术分别是分子杂交和抗原-抗体杂交。 【知识总结】对限制酶切割位点的两点要求 (1)位置要求:限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外,从而保证标记基因的完整性。 (2)数量要求:选择限制酶切割目的基因时,被选择的限制酶在目的基因的两侧都要有识别序列,这样切割出来的目的基因才能与质粒结合。 2.(2015·铜仁模拟)chlL基因是蓝藻DNA上控制叶绿素合成的基因,为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失chlL基因的变异株细胞。技术路线如图甲所示,请据图分析回答: (1)与真菌相比较,蓝藻在结构上最主要的特点是 ,在功能上最主要的特点是 。 (2)①②过程中均使用的工具酶有 。 (3)构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是_________________ 和 。 (4)若含有chlL基因的DNA片段和选用的质粒上的限制酶切割位点如图乙所示。请回答: ①构建含chlL基因的重组质粒A时,应选用的限制酶是 ,对 进行切割。 ②同时用酶1和酶4切割图乙中的质粒,则产生含有1 800对碱基和 8 200对碱基的两种片段;用图中四种酶同时切割此质粒,则产生含有600对碱基和8 200对碱基的两种片段;若换用酶1和酶3同时切割此质粒,则产生的片段是 。 【解析】(1)蓝藻为原核生物,没有以核膜为界限的细胞核,其体内含有光合色素,能进行光合作用。 (2)表达载体构建时需限制酶和DNA连接酶等工具酶。 (3)由题干信息“构建该种生物缺失chlL基因的变异株细胞”可知,构建重组质粒B的目的在于破坏chlL基因并筛选出变异株细胞。 (4)①由图乙知,获得chlL基因需酶1和酶3对此基因所在的DNA进行切割,同时对质粒也要用同种酶切割处理,以便构建重组质粒A。 ②由题意知四种酶同时切割时含600对碱基的片段共有3个。若用酶1和酶3同时切割时,产生的片段有8 200+600=8 800对碱基;另一片段为600×2=1 200对碱基。 答案:(1)没有以核膜为界限的细胞核 能够进行光合作用 (2)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 (3)破坏chlL基因 操作成功后筛选出该变异株细胞 (4)①酶1和酶3 质粒和含chlL基因的DNA ②含有1 200对碱基和8 800对碱基的两种片段 【加固训练】 1.土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌,它带有Ti质粒。Ti质粒是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段,其上只有T-DNA片段才能转入植物细胞的基因组。Ti质粒的结构及转化过程如图所示,请分析并回答: (1)为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤,需对Ti质粒进行修饰,即去除冠瘿瘤基因,将抗旱基因转移至 片段,然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养,此时修饰的T-DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。 (2)将上述外植体置于一个含有 的选择培养基中进行筛选,发生转化的外植体开始增殖,形成 后,通过产生不定芽再长出整个植物。 (3)基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定,可以直接在个体水平对上述转基因植物与非转基因植物的 性能进行比较。 【解析】(1)目的基因要插入T-DNA上,外植体与
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