泛素特异性蛋白酶Usp46与Usp26基因错义突变对去泛素化酶活性的影响和其流行病学意义.pdf

结果…… 69 附图…… 74 附表…… 91 讨论…… 95 小结…… 97 参考文献 97 结论…………………………………………………………………………101 综述…………………………………………………………………………．102 致谢…………………………………………………………………………120 个人简历……………………………………………………………………121 中文摘要 活性的影响及其流行病学意义 摘 要 泛素．蛋白酶体通路(Ubiquitinproteasomepathway)通过特异性地 降解细胞内的蛋白质来调控多种细胞进程，包括细胞周期、免疫反应、 肿瘤生长和炎症等。该通路由泛素、泛素化酶(包括泛素活化酶El、泛 素结合酶E2和泛素连接酶E3)、蛋白酶体和去泛素化酶组成。泛素化 酶给底物蛋白加上泛素标签，泛素化的蛋白质被运送到蛋白酶体降解。 正如磷酸化和去磷酸化一样，蛋白质的泛素化也是一个可逆的过程，去 泛素化酶通过对底物蛋白的去泛素化来调控蛋白质的寿命。 尽管在决定蛋白质寿命方面，泛素化与去泛素化同等重要，但对去 泛素化酶的研究远落后于泛素化酶。近年来，去泛素化酶是多种神经精 济失调等)，以及USP7抑癌基因功能的发现，使去泛素化酶的研究开 始引人注目。 (Ubiqukin．specific 能至今仍所知甚少。 码366个氨基酸。2009年Tomida等在Nat AK92突变小鼠在悬尾试验 小鼠“行为绝望’’的数量基因，发现Usp46 (Tail Test)和强迫游泳试验(ForcedTest)中几 Suspension Swimming 乎没有不动时间。进一步对其机制进行研究的结果表明，Usp46的第92 控GABA系统，然而调控机制不明。本研究采用去泛素化酶活性检测系 统来深入探讨第92号赖氨酸的缺失对USP46酶活性的影响，以及人群 错义突变与精神性疾病间的关联奠定基础。 中文摘要 而各研究的结果并不一致。本研究的目的是采用去泛素化酶活性检测系 影响，深入探讨Usp26基因错义突变与男性不育症的相关性。 第一部分：泛素特异性蛋白酶Usp46基因错义突变对去泛素化酶活性的 影响及其在健康人群和ADI-ID患者中的分布情况 目的： 去泛素化酶通过负向调节泛素．蛋白酶体通路影响细胞内蛋白质的寿 在悬尾试验和强迫游泳试验中几乎没有不动时间的主要原因。 去泛素化酶活性检测系统检测第92号赖氨酸的缺失对USP46酶活性的 影响，为研究Usp46调控GABA系统的分子机制提供新的思路。并且， V96I错义突变对酶活性的影响，建立V96I突变 通过检测人群中Usp46 的基因分型方法，检测V96I错义突变在健康人群及注意缺陷多动障碍 的关联奠定基础。 方法： 1．pGEX．Usp46(A 模板，利用定点突变的方法构建pGEX．Usp46(A (V96I)突变型。对突变产物进行限制性内切酶酶切和钡9序鉴定。 入pAC．T7质粒的BamH