细菌超广谱β内酰胺酶与耐药性解说.ppt

细菌ESBL酶与耐药性 主讲人：华耀 细菌超广谱β－内酰胺酶与耐药性 1、什么是β－内酰胺类抗生素？ 2、什么是β－内酰胺酶？ 3、什么是超广谱β－内酰胺酶？ 4、它们与细菌耐药有什么关系？ 一、β－内酰胺类抗生素 青霉素发现者、英国科学家弗莱明（1928） (二) β－内酰胺类抗生素抑制细菌的机理 N-乙酰葡萄糖胺 双糖十肽 转肽酶 N-乙酰胞壁酸五肽 聚合物 （PBPs） 二、β－内酰胺酶 （一）概念 β-内酰胺酶（β-lactamase）是细菌产生的可水解β-内酰胺类抗生素的酶。 绝大多数常见的β-内酰胺酶有一个依赖丝氨酸发挥作用的机制。通常它们的活性位点具有一个狭窄的纵形沟状结构，在沟的底部形成了一个空腔（氧阴离子袋），这种疏松的构造容易弯曲，便于结合底物。 （二）、β-内酰胺酶是细菌耐药的机理 （三）β-内酰胺酶分类方法 一、Bush-M-J分类法（功能分类法） 根据β-内酰胺酶的功能相似性（底物和抑制物的轮廓）分为1 ，2 ，3 ，4 四组，其中2组和3组又分为很多亚组。 二、Ambler分类法（分子分类法） 根据酶的氨基酸序列的保守性和相似性将β-内酰胺酶分为A，B，C，D四组。 三、超广谱β- 内酰胺酶 （一）概念 超广谱β- 内酰胺酶(extended spectrum beta - lactamases , ESBLs) 是由质粒介导的能赋予细菌对多种β- 内酰胺类抗生素和单酰胺环类抗生素耐药并可被 β-内酰胺酶抑制剂所抑制的一类 β-内酰胺酶. (二)超广谱β- 内酰胺酶特点 （1）主要是有质粒介导 ESBLs 基因由质粒介导, 可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散。 （1）TEM型 ESBLs TEM 型 ESBLs 由 TEM- 1 衍化而来。在 TEM 家族中 TEM- 3 是第一个显示 ESBLs 特点的 TEM 型 β- 内酰胺酶。TEM 型 ESBLs 的形成是因为238位甘氨酸突变为丝氨酸所形成的。这种突变提高了对头孢噻肟的水解能力。 2005 年发现的 TEM- 94发生了104,238 氨基酸位点的改变, 药敏实验证实其对头孢泊肟和头孢噻肟耐药。 （三）超广谱内酰胺酶类型 目前发现的超广谱 β- 内 酰 胺 酶 种类已超过 200 多种, 其类型可以分为 TEM 型、SHV 型、OXA 型、CTX- M 型、其它型等 5 类。其中 TEM和 SHV 型酶是临床上较常见的超广谱 β- 内酰胺酶。 （2 ）SHV 型 ESBLs SHV 型 ESBLs 是由 SHV- 1 衍化而来。SHV 家族中第一个 SHV 型 ESBLs 是 SHV- 2。SHV- 2 发生了 Gly- 238- Ser 位点的突变, 这增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力。 对比其它的 SHV 型 ESBLs 氨基酸序列分析发现, 氨基酸的突变主要集中在 179, 238, 240, 205 位点。 （三）ESBLs的检测方法1、标准纸片扩散法 （1）表型初筛试验 按标准纸片扩散法操作，当下述抗菌药物的抑菌环直径头孢泊肟(10μg)≤17mm 或头孢他啶(30μg)≤22mm 或氨曲南(30μg)≤27mm 或头孢噻肟(30μg)≤27mm或头孢曲松(30μg)≤25mm时，提示为可疑产ESBLs菌株。 （2） 表型确证试验 使用头孢他啶(30μg)和头孢他啶/克拉维酸(30/10μg)及头孢噻肟(30μg)和头孢噻肟/克拉维酸(30/10μg) 两对药敏纸片，当两个药物中有任何一个在加克拉维酸后抑菌环直径与不加克拉维酸的抑菌环相比增大值≥5mm，可确认为产ESBLs菌株。 2 三相水解试验 区分菌株为产ESBLs或产头孢菌素酶（AmpC酶） ESBLs和AmpC酶同时产生的情况。 3、E-test 法 E-test，为AB BIODISK公司开发的测试ESBLs的试剂条。应用表型确证试验的原理，将头孢他啶（或头孢噻肟）和复方制剂头孢他啶/克拉维酸（或头孢噻肟/克拉维酸）分别置于试条两端，将试条贴于接种了待测细菌的平板上，刻度面朝