大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化.pptx

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2017-05-15 发布于湖北
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大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化.pptx

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大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化

感受态的制备和质粒的转化;材料及方法 CaCl2法制备感受态的原理感受态细胞的制备质粒的转化转化子的筛选 ; 材料及方法菌种：大肠杆菌BL21菌株质粒：pGEX-6P-1 感受态制备方法：CaCl2法转化方法：热激法 ;CaCl2制备感受态的原理: 细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物。;感受态的制备;离心弃上清;质粒的转化;转化子的筛选;转化率转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此平板中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下：转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积转化频率（转化子数/每ug质粒DNA）＝转化子总数/质粒DNA加入量（ug）转化子总数＝N×1×200/200＝N 转化频率＝N/10-4（0.1 ng=10-4?ug）＝N×104`