微生物工程第一章菌种与种子扩大培养剖析.ppt

（3）、防止衰退的方法 做好菌种的保藏工作 尽可能满足生长条件 尽量减少传代次数 （4）、菌种的分离复壮 普通方法：稀释平板法或平板划线法分离单细胞菌落 芽孢杆菌：先将菌液沸水处理数分钟，再用平板进行分离 改变培养条件：如单细胞分离仍效果不佳，可考虑改变培养温度条件，以利高产菌株生长而不利低产菌株生长 返回 第二节 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与要求 工业微生物的培养类型 种子制备的技术概要及种子制备实例 影响种子质量的因素 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 一、 种子扩大培养的目的与要求 种子扩大培养的概念: 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 二、工业微生物的培养类型 两步法液体深层培养 固态培养 载体培养 液体深层培养 固体培养 酒精、丙酮、丁醇、乳酸等 大规模工业生产 好气性发酵 嫌气性发酵 表层培养 液体培养 种子扩大培养 通气培养 静置培养 培养类型 返回 三、 影响种子质量的因素 （一）、种子制备的过程 （一）、种子制备的过程 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。 （二）、实验室阶段 1、培养物选择的原则 目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类： 对于不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体 对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。 获得一定数量和质量的孢子 菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。 对于产孢子的微生物 获得一定数量和质量的菌丝体 便于操作，但需要更仔细的控制。 2、培养基选择的原则 培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。 在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。 3、起始接种物的传代问题 细菌 保藏斜面 → 活化斜面 产孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面 目的：使菌种的传代次数尽可能的少。 母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。 所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。 子瓶: 大量繁殖，得到大量孢子。 接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落 ②接种时密一点，得到大量的孢子。 孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月。 孢子培养 不产孢子的细菌如谷氨酸棒杆菌和短杆菌，采用斜面营养细胞保藏法，2~3月移种1次 产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种如灰色链霉菌和卡那霉菌，可将孢子接入液体培养基中形成菌丝体种子。 （三）、生产车间阶段 1、培养物的选择原则 在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。 缩短发酵时间 有利于获得好的发酵结果 菌丝体比孢子要有利： 2、培养基选择的原则 目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。 在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因: 一是成本 二是驯化 例：柠檬酸发酵 以蔗糖为原料 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 蔗糖 2.5-5% 20% NH4NO3 0.225% 0.11% K2HPO4