1.1DNA重组技术的基本工具详解.pptVIP

专题1 基因工程 基因与DNA 的关系？ 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1、来源： 3、结果 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。 三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子 运输车” 三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子 运输车” 2、 常用的运载体主要有两类： 1）病毒，包括植物病毒、动物病毒和 细菌病毒（噬菌体） 2）质粒 质粒：质粒是基因工程最常用的运载体。 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并且有自我复制能力的双链环状DNA分子。 联系你已有的知识，想一想，为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。 细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。 生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵 A G T A C A A A T G C G A C G T G T T A T A G T A C A A A T G G C G G T T A T T A T C 与DNA有关的酶 四种酶的比较 1．(2010·苏州模拟)下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是 (　　) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A．①②③④ B．①②④③ C．①④②③ D．①④③② C 2.下列有关限制性内切酶识别的叙述，不正确的是 (　) A．从反应类型来看，限制性内切酶催化的是一种水解反应 B．限制性内切酶的活性受温度、pH的影响 C．一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列 D．限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小 　 　 　 　 　 D 3.据右图所示，有关工具酶功能的叙述不正确的是（　 ） A. 限制性内切酶可以切断a处，DNA连接酶可以连接a处 B. DNA聚合酶可以连接a处 C. 解旋酶可以使b处解开 D. 连接C处的酶可以为DNA连接酶 D 1、限制酶和DNA解旋酶的区别？ 2、限制酶和DNA水解酶的区别？ 断开：磷酸二酯键 氢键 都断开磷酸二酯键 产物：DNA片段 单个脱氧核苷酸 3、切取目的基因需切割几次？切口数量？ 2、4 4、如何防止切下的目的基因自身环化？ 不同限制酶切割 1、运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将外源基因转移到受体细胞中去。 作用二：利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 3、作为运载体必须具备哪些条件？ 1）有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中。 2）具备自我复制的能力，或整合到受体细胞染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等。 4）对受体细胞有无害。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 * * * 基因是有遗传效应的DNA片段， 是生物体遗传的功能单位和结构单位。 基因是一段DNA，但是一段DNA不一定是基因。 基因能控制生物的性状。 基因有遗传效应。它可以独立起作用。 类别 项目 ? 复制 ? 转录 场所 特点 模板 原料 酶 能量 碱基 配对 产物 类别 项目 ? 复制 ? 转录 场所 特点 模板 原料 酶 能量 碱基 配对 产物 细胞核 只有DNA的一条