第十章紫外可见分光光度法简化要点分析.pptVIP

芦丁含量测定 0.710mg/25mL 3．对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液的浓度。 解： （二）多组分的定量方法 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb 3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 （1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法 （3）系数倍率法 1．解线性方程组法 步骤： 2．等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b 消去b的影响测a 须满足两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大 第四节 比色法 4. 温度 很多显色反应在室温下进行。 * * * * A＝－ lgT ＝ － lg（ I / I0)=Ecl A值越大，表明物质对光的吸收越大。 T值越大，表明物质对光的吸收越小。T值越小，表明物质对光的吸收越大。 百分数表示 吸光度与透射率 C A＝-lgT ＝-lg(I/I0)= E l c? 1.0 0.5 0 A C T ＝10 –A=10- Elc? 100 50 0 T % 多组分混合体系中，如果各组分分子之间不存在离解、聚合、化学反应等化学平衡时，其吸光度具有加合性，即： 2.吸光度的加合性 3.Lamber-Beer定律 描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系。 A＝－ lgT ＝ － lg（ I / I0)= Ec l ? Lamber-Beer定律的适用条件（前提）： 入射光为单色光、溶液是稀溶液 4 . 吸光系数：定性定量的依据 （1）吸光系数的物理意义： 单位浓度、单位厚度的吸光度 （2）吸光系数两种表示法： 1）摩尔吸光系数ε： 在一定λ下，c=1mol/L，l=1cm时的吸光度 2）百分吸光系数 / 比吸光系数： 在一定λ下，c=1g/100ml，l=1cm时的吸光度 3）两者关系 讨论： 1）不同物质在同一波长下E可能不同（选择性吸收） 2）溶剂不同，同一物质E可能不同。应注明溶剂。 3）E↑，物质对光吸收能力↑, 定量测定灵敏度↑ → 定性、定量依据 例1 某溶液用2cm吸收池测量时，T=60%，若改用1cm和3cm吸收池，T和A为多少。 解 例2 浓度为0.51mg/ml的Cu2+溶液，用环己酮草酰二腙显色后，于波长600nm处用2cm吸收池测量，测得T=50.5%，求比吸光系数。 六、偏离Beer定律的因素 依据Beer定律，A与c关系应为 经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面 （1）光学因素 （2）化学因素 （1）光学因素 1）非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 Emax越大表明该物质的吸光能力越强， 测定的灵敏度越高。 1.0 0.5 0 A C 正偏离 负偏离 ２.化学因素　　　　稀溶液 Beer定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 e.g. 重铬酸盐溶液中存在下列平衡： Cr2Ｏ72- ＋H2Ｏ CrＯ42- ＋2H＋ CrＯ42-、 Cr2Ｏ72-的吸光性质不同，即ε(λ)不同。 仪器光源不稳定、吸收池厚度不一致等仪器问题，引起的误差，导致对光的吸收定律的偏离。 3.仪器因素 （三）透光率测量误差 影响测定结果的相对误差两个因素：T和ΔT 1）暗噪音：与检测器和放大电路不确定性有关与光 讯号无关 2）讯号噪音：与光讯号有关 ΔT影响因素：仪器噪音 A=-lgT ＝0.434 T ＝0.368=36.80% 当 △ T= 0.5%时： 适宜的吸光度测量范围：A＝0.2~0.7 △ T= 0.2%~