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DNA的合成方向总是从子链的___端向___ 端延伸。 5′ 3′ 酶 : 原料: 模板: 引物： 其它： 耐热的DNA聚合酶，一般用TaqDNA聚合酶 四种脱氧核苷酸 DNA的两条链 2种,分别与两条模板链相结合 稳定的缓冲液环境、严格控制温度 【互动探究】　(1)PCR中由碱基错配而引起哪种变异？ (2)假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所用DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占多少？ 【提示】　(1)基因突变。　(2)50% 【易误警示】　(1)DNA母链的3′端对应着子链的5′端，即DNA的两条链是反向平行的。 (2)解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开，而DNA聚合酶与DNA连接酶都是催化形成磷酸二酯键的。 (3)DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板，而DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。 (2011年聊城高二检测)下列关于DNA复制和PCR的描述中，正确的是(　　) A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B．DNA复制不需要引物 C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．PCR扩增的对象是氨基酸序列 【尝试解答】　__C__ 例1 【解析】　由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物，而且它与DNA母链通过碱基互补配对结合。PCR扩增的对象是DNA，而不是氨基酸。 【探规寻律】　(1)引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。包括引物Ⅰ和引物Ⅱ两种。用于PCR的引物长度通常为20～30个核苷酸。 (2)细胞内DNA复制与PCR技术的原理和过程容易发生混淆，特别应注意区分PCR反应需要可变的温度，而体内DNA复制需要稳定的温度。 跟踪训练　(2011年海淀区高二检测)关于DNA片段PCR扩增实验的描述中不正确的是(　　) A．加入的Taq DNA聚合酶耐高温 B．不同大小DNA在电场中迁移速率不同 C．此过程需要DNA连接酶 D．扩增区域由两种引物来决定 解析：选C。PCR扩增实验是在较高温度下进行的，故需要耐高温的Taq DNA聚合酶，但不需要DNA连接酶，A项正确，C项错误。因为不同大小的DNA带有不同数量的电荷，所以在电场中迁移速率不同，B项正确。PCR扩增需要两种引物，分别与DNA的两条模板链互补，则D项正确。 PCR反应的实验操作过程 1．反应体系的配方 10倍浓缩的扩增缓冲液 5 μL 20 mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液 1 μL 20 μmol/L的引物Ⅰ 2.5 μL 20 μmol/L的引物Ⅱ 2.5 μL H2O 28～33 μL 1～5 U/μL 的TaqDNA聚合酶 1～2U 模板DNA 5～10 μL 注：①总体积50 μL，②模板DNA的用量在1 pg～1 mg之间 2.实验用具 (1)PCR仪：PCR自动化程度较高，参照下表设计程序即可。 循环数 变性 复性 延伸 预变性 94 ℃，5 min － － 30次 94 ℃，30 s　 55 ℃，30 s 72 ℃，1 min 最后一次 94 ℃，1 min 55 ℃，30 s 72 ℃，1 min 若无PCR仪，可用恒温水浴锅代替，三个恒温水浴锅的温度分别为94 ℃、55 ℃和72 ℃，然后按照上表要求，在三个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：一种薄壁塑料管，总容积为0.5 mL。 (3)微量移液器：用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。 (2011年长春高二检测)多聚酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸等。反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如图所示。 例2 (1)某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A∶G∶T∶C＝1∶2∶3∶4，则经过PCR仪五次循环后，将产生________个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是________个。 (2)分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是 _____________________________________________________________________________________________________________________________________。 (3)由于DNA分子上的“遗传因子”基本都是符合孟德尔的遗传规律的，