采用agilentbiomabnp5色谱柱分析完整和羧基末端消解的igg1.pdfVIP

采用Agilent Bio MAb NP5 色谱柱分 析完整和羧基末端消 的IgG1 应用简报 生物制药 作者 摘要 Xiaomi Xu 和 Phu T Duong 几乎所有蛋白质在 mR A 翻译完成后都要经历修饰过程，而此类修饰很可能表现为重链 安捷伦科技有限公司 羧基末端赖氨酸的存在或缺失。因此，监测单克隆抗体，特别是 IgG1 产品的一致性有着 重要意义。安捷伦 Bio Mab 色谱柱专门设计用于单克隆抗体的电荷异质性 （包含羧基末 端赖氨酸变异）分析。Agilent Bio MAb P5 （非多孔型，5 µm）4.6 × 250 mm PEEK 色 谱柱能够实现更高的分离度，同时能够改善峰形、提高定量准确度。将该型色谱柱安装 于两种不同的高效液相色谱 （ 生物惰性四元液相色谱和 Agilent 1260 Inf inity Agilent 1100 系列液相色谱）系统中，对两种不同来源的IgG1 进行分析。 前言 色谱条件 色谱柱： ， （部件号 ） Agilent Bio MAb P5 4.6 x 250 mm PEEK 5190-2407 过去的十年中，单克隆抗体/IgG1 (mAb) 作为一种重要的生物治 流动相： A. 10 mM pH 5.5 磷酸钠缓冲液 疗药物逐渐被大家所认知。然而由于其结构较为复杂，IgG1 常常 B. A + 0.5 M aCl 表现为高度的异质性，这种异质性包含了各种各样的翻译后修饰。 流速： 0.85 mL/min 梯度程序： 0-25min ，10-35% B （除非另有说明） 其中，比较常见的是治疗性抗体重链上羧基末端不同水平的赖氨 检测： UV 225 nm 酸修饰。虽然尚未完全掌握此类修饰对 IgG1 生物活性的影响，但 样品： 5 µL 1 mg/mL 完整或羧基末端消解的IgG1 是羧基末端赖氨酸变体异质性的程度能够反映产品的一致性，因 仪器： Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱或Agilent 1100 系列 此有必要对其进行评估。阳离子交换色谱法是表征 IgG1 电荷异质 液相色谱 性的有效 段， 具有良好的选择性，可以 Agilent Bio MAb P5