汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用研析.pdf

安美霞博士论文 中文摘要 汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞 抑制作用的研究 专 业： 眼底病眼科药理 博士生： 安美霞 指导老师： 胡世兴 中山大学 中山眼科中心 中文摘要 翼状胬肉(Pterygium)为临床常见病、多发病，病理表现为纤维血管组织 增生并向角膜侵犯。它常导致美容缺陷，甚至造成视力障碍。翼状胬肉的病因 和发病机制尚未完全清楚。目前认为其发生与紫外线照射密切相关，成纤维细 胞被紫外线照射后致细胞发生转变而具有侵袭性，也有认为是凋亡控制的失调 所致，变态反应性炎症也涉及其中。目前仍以手术治疗为主，但手术治疗使病 人产生恐惧心理，且术后复发率较高，现有的防治药物主要是抗肿瘤药，可选 择的药物少且副作用多，寻找新的有效的治疗药物具有重要的临床意义。传统 的中药具有作用广泛，副作用少等优点，研究证实，由防已科植物提取的生物 等作用，安全、副作用少。已有报道Tet可抑制体外培养的兔结膜成纤维细胞 的生长，但目前尚无用于人体结膜相关疾病的实验研究，本课题首次直接以培 养的人体翼状胬肉成纤维细胞及组织本身作为研究对象，探讨中药单体汉防己 甲素治疗翼状胬肉的有效性、安全性及作用机制。 安美霞博士论文 ； 中文摘要 第一部分 正常球结膜与翼状胬肉成纤维细胞生长增殖状况的 对比观察 目的：对比观察在相同的培养条件下翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞的生 长增殖状况，对两种成纤维细胞的生长增殖特性作出评价。 方法：(1)用含10％胎生牛血清的RPMI1640培养液，在相同的培养条件 下体外培养正常球结膜与初发翼状胬肉组织成纤维细胞。 (2)倒置相差显微镜下观察体外培养的两种成纤维细胞的特点，生长增殖状 况。 (3)传第三代的翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞，分别于接种后第二天、第 bromid，MTT]比色试验，检测细胞增殖活力(细胞数)。 结果：翼状胬肉成纤维细胞较正常结膜成纤维细胞生长快，旺盛； MTT 检测结果显示：第五天翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数多于正常结膜成纤维细 胞(pO．05)，第八天更明显(萨0．01)。 结论：翼状胬肉成纤维细胞的生长、增殖特性与正常结膜成纤维细胞不同， 明显强于正常结膜成纤维细胞，可能其为转化了的成纤维细胞。提示：治疗翼 状胬肉药物的筛选和疗效评价的实验研究应直接以翼状胬肉成纤维细胞为研究 对象，才能作出较为符合客观实际的评价。 第二部分汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究 目的：观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探 讨其机制，寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物。 方法：(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下，体外培养的翼状 胬肉成纤维细胞形态的变化，并与丝裂霉素(Mitomycin，MMC)进行比较。 (2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维 细胞增殖的抑制作用，并与MMC进行比较。 Ⅱ 安美霞博士论文 中文摘要 (3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h，体外培养的翼状胬肉成纤维 细胞细胞周期的变化。 结果：(1)体外培养的翼状胬肉成纤维细胞以长梭形为主，放射状排列．，Tet 作用下，细胞胞体收缩，变圆，间隙增宽，药物浓度高时，见细胞碎裂，浮起。 0．01％MMC、0．02％MMC作用下见大量细胞碎裂，溶解。 (2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有 对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(矿0．05oTet的IC50接近j0‘5M (为0．848x10’5M)。 (3)流式细胞仪检测结果显示：Tet作用下，翼状胬肉成纤维细胞周期中S 期细胞增多，浓度越高，作用越明显。 结