环境微生物实验指导书2010.5.25(修改).docVIP

环境微生物学实验指导 龙建友 崔明超 夏建荣 编 广州大学环境科学与工程学院 二零壹零年四月 实 验 室 守 则 为了维持环境工程微生物实验室的工作秩序，保证环境工程微生物学实验的教学质量，特制定本守则。 1. 进入环境生物学实验室的学生必须严格遵守实验室的各项规章制度。 2. 认真预习《环境微生物学实验指导》，明确每次实验的目的、要求、原理和方法，做到心中有数。 3. 仔细观摩实验指导老师的讲解和示范，了解仪器设备的基本技能，掌握实验操作的基本 要领，严格按照规程操作。 4. 珍惜每次实验机会，重视各项试验技能，认真观察实验现象，如实做好实验记录。 5. 需集中处理的物品，应注明组别、名称及处理方法，放在教师指定的地方。 6. 实验结束后，做好仪器设备、试剂药品等整理工作，经教师验收后，将仪器设备放回原处。值日学生做好实验室的清洁卫生工作。 7. 提倡科学严谨的实验作风。仔细整理实验结果，认真完成实验报告，并将报告按时交给指导老师披阅。 8. 爱护国家财产。如因违规操作而损坏仪器设备，须按学校有关规定赔偿。 9. 保持实验室安静，维护实验室整洁。 目录 实验一 光学显微镜的使用 实验四 水中细菌总数的测定 实验五 土壤微生物的计数法 实验六 微生物的染色 实验七 水中总大肠菌群的测定 实验八 环境样品蛋白质含量的测定 实验九 重金属污染物对光合作用强度影响的测定 实验十 叶绿素a的测定 实验十一 聚合酶链反应 实验1 通光学显微镜的使用普通光学显微镜简称光学显微镜（light microscope），以平均波长为550nm的可见光作为光源，能分辨的两点距离为0.22。多数细菌的个体大于0.25μm，因此可在光学显微镜下观察。由于许多细菌的大小与光学显微镜的分辨率处于同一个数量级，为了看清细菌的形态与结构，经常使用油镜来提高显微镜的分辨率。在光学显微镜的使用中，油镜的使用是一项十分重要的操作技术。 一、目的要求 1．了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。 2．学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3．在油镜下观察细菌的几种基本形态。 4．采用悬滴法在高倍镜下观察细菌运动。 二、基本原理 （一）普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1．机械系统 机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。 （3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。 （4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。 （5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；装有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。 （6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。粗调旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。 2．光学系统 光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。 （1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故又称它为视野光阑。标本成像于光阑限定的范围之央光阑上粘上一小段细发可用作指针，指示视野标本的位置。在进行显微测量时，目镜测微尺被安装在视野光阑上。目镜上刻有5×、10×、15×、20×等放大倍数。可按需选用。 （2）物镜：它的功能是民标本放大，产生物像。物镜可分为低倍镜（4×或10×）、中倍镜（20×）、高倍镜（40×~60×）和油镜（100×）。一般油镜上刻有“OI”（oil immersion）或HI（homogeneous immersion）字样，有的刻有一圈红线或黑线，以示区别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径（numerical aperture，简称NA）、工作距离（物镜下端至盖玻片间的距离，mm）及盖玻片厚度等参数。以油镜为例，100/1.25表示放大倍数为100倍，NA为1.25；160/0.17表示镜筒长度160mm，盖玻片厚度等于或小于0.17mm。 （3）聚光器：聚光器又称