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MiRNA Let-7 在氡致大鼠肺损伤中的表达改变 中文摘要 中文摘要 目 的：探讨miRNA Let-7 在氡致大鼠肺损伤中的作用，为氡致肺癌的分子机 制提供实验资料。 方 法：(1) 雄性 Wistar 大鼠吸入染毒后，检测 Let-7 在氡致大鼠肺组织损伤 中的表达情况。组织病理学HE 染色观察大鼠肺组织病理学改变；提取大鼠肺组织 RNA ，Real-time PCR 检测肺组织中 Let-7 家族的表达水平；并筛选出两个亚类 （Let-7a-2-3p 和Let-7b-3p ）。生物信息学方法预测Let-7a-2-3p 和Let-7b-3p 的靶基 因，并检测其表达水平。(2) 采用人支气管上皮细胞 (Human bronchial epithelia， HBE)进行氡染毒，流式细胞术 DCFH-DA 荧光探针测定细胞内活性氧(Reactive oxygen species, ROS) ；JC-1 荧光探针测定线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential, MMP) ；PI 单染法分析细胞周期分布。提取细胞RNA ，采用Real-time PCR 检测 Let-7a-2-3p 和 Let-7b-3p 在氡染毒细胞中的表达情况及靶基因表达水平。(3) 将 Let-7a-2-3p 和 Let-7b-3p 分别转染至 HBE 细胞后进行氡染毒，流式细胞术 DCFH-DA 荧光探针测定ROS ；JC-1 荧光探针测定MMP ；PI 单染法分析细胞周期。 提取细胞RNA ，Real-time PCR 检测Let-7a-2-3p 和Let-7b-3p 靶基因的表达情况。 结 果：(1) 大鼠肺组织病理结果，与正常对照组相比，可见氡染毒组肺间质 充血水肿，肺泡间隔增厚，炎症细胞浸润，肺泡腔逐渐萎缩变小。Let-7a-2-3p 、 Let-7b-3p 、Let-7b-5p 表达随氡染毒剂量的增加而降低，具有统计学意义。 Let-7a-1-3p、Let-7a-5p 表达下降，但差异不显著。靶基因预测交集显示其靶基因 为K-ras 基因，其 mRNA 表达随氡染毒剂量的增加而增加。Pearson 分析结果K-ras 与Let-7a-2-3p、Let-7b-3p 表达呈负相关。(2) 氡染毒HBE 细胞后，随着染毒剂量 的增加，ROS 水平降低，MMP 升高，细胞周期阻滞于G1 期。Let-7a-2-3p、Let-7b-3p 表达随氡染毒剂量的增加而显著降低，其靶基因K-ras mRNA 表达随氡染毒剂量的 增加而增加，并具有统计学意义。 (3)将Let-7a-2-3p 与Let-7b-3p 转染至HBE 细 胞，并进行氡染毒，建立了Let-7 过表达的细胞模型。Let-7 过表达后染氡细胞ROS 和MMP 水平显著降低。G1 期延长，S 期缩短，G2/M 期缩短，靶基因K-ras 的表 I 中文摘要 MiRNA Let-7 在氡致大鼠肺损伤中的表达改变 达增加。 结 论：(1) 氡染毒后，大鼠肺组织细胞和HBE 细胞中MicroRNA Let-7 的表 达发生改变。(2) K-ras 可能是MicroRNA Let-7 的靶基因。(3) 建立了MicroRNA Let-7 过表达的细胞模型。 关键词：氡；MicroRNA Let-7 ；肺损伤 研 究 生：顾 超 指导教师：童 建 教授 II MiRNA Let-7 在氡致大鼠肺损伤中的表达改变 英文摘要 Changes i