缺氧对卵巢癌细株SKOV3细胞生物学行为的影响及其相关机制.pdfVIP

中文摘要 前 言 目的： 通过卵巢癌细胞系体外实验，研究缺氧／复氧后，卵巢浆液性囊腺癌细胞株 inducible SKOV3的细胞生物学行为改变，及其与缺氧诱导因子1a(hypoxia factor1Q，HIF-1a)表达变化的关系；探讨缺氧后SKOV3细胞E一钙粘蛋白 的相互调控关系。实验分三部分进行。 第一部分 材料与方法：体外常规培养、传代卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3。分别 流式细胞仪检测细胞周期：采用transwell法检测细胞侵袭能力，采用明胶酶谱 法检测基质金属蛋白酶活性，采用RT—PCR检测缺氧／复氧后不同时间基质金属蛋 1 Q和SNAIL基因的mRNA表达，采用westernblot检测HIFd的蛋白表达。用 HIF—l d抑制剂Rapamycin预处理细胞30分钟后，检测上述细胞处理后的生物学 行为的变化，探讨此生物学行为变化的可能机制。 结果： 缺氧／复氧后卵巢癌细胞SKOV3的增殖能力增强。缺氧后复氧24h细胞增殖 流失细胞仪分析显示复氧24h内S期细胞所占比例(48．45±1．15％)较对照组 于GO—G1期从而降低细胞的增殖能力。 明胶酶谱和Transwell的结果显示缺氧／复氧后肿瘤细胞的侵袭能力增强。 a抑 稳定表达BIF-1Q，缺氧可以使BIF一1n蛋白表达增加，与常氧培养组相比有统 计学意义。缺氧／复氧后HIF一1a蛋白表达短时间内迅速下降，随即逐渐恢复至 常氧表达水平。 第二部分 材料与方法： 4 a和E-cad的mRNA表达，western 和Realtime 表达的影响。用HIF一1a抑制剂Rapamycin预处理细胞30分钟后，并在缺氧处 Q表达的关系。 理后，检测上述各指标的变化，探讨E-cad与HIF一1 结果： 常规培养的SKOV3稳定表达HIF一1Q和E-cadherin。缺氧使HIF一1o蛋白 水平表达增加，于缺氧16h达到峰值，为对照组的6．2倍(P=O．005)，并维持 高表达；缺氧不同时间，HIF一1 白均随缺氧时间延长而表达下降，缺氧16和24h其表达分别为对照组的48％(P 表达则随缺氧时间延长而逐渐增强，realtimePCR显示常氧培养的SKOV3中 16h为3．978±0．373x106，缺氧24h为5．681±O．65×1 06，较对照组相比均有 统计学差异。Rapamycin可以抑制缺氧诱导的HIF一1Q和SNAIL基因的表达增加， Q表达，防止E-cad在缺氧环境中的降低。 第三部分 材料与方法： 运用HIF一1Q刺激剂cobalt HIF一1 a过表达，检测HIF一1 其HIF一1Ⅱ和SNAIL之间的作用关系。 Ⅱ和SNAIL基因的SiRNA，转染SKOV3细胞，RT—PCR检测干扰后HIF—la和SNAIL time 基因mRNA表达，RealPCR检测SNAIL基因mRNA表达，WesternBlot检测 HIF～1 o的蛋白表达。进一步明确两者之间的相互关系。 结果： 利用CoCl。作用于SKOV3细胞，使HIF—l a过表达，则Rapamycin失去对 SNAIL基因的抑制作用。RNA干扰显示，HIF一1d的SiRNA不但可以下调HIF一1Ⅱ