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Varian 300 系列LC/MS 现场培训资料——方法开发美国瓦里安技术中国有限公司南区市场部电话：021传真：021使用液质需要特别注意的事项： 不要使用不挥发性缓冲盐（如磷酸盐等） 用有机缓冲盐的浓度不能太高，小于10mM 尽量避免含无机盐的样品进样分析 进样浓度不要太高，几个ppm以下 不要使用塑料容器装有机溶剂 不要使用洗涤剂清洗玻璃容器 未知样品不要轻易进样分析 1、背景信息： 1.1 样品基本信息 样品名称 可能含有的杂质 是否含盐 溶解性 保存状态 1、背景信息： 1.2 样品来源处或查询文献获得以下信息 LC/MS进行化合物分析时，需要的流动相和添加剂 离子源 （ESI 或 APCI） 离子化模式（正或负） 分析条件 （温度和电压等） 色谱条件 非常好的一个资源： “LC/MS Methods: An Essential Tool to Accelerate Methods Development” 网址： 2、准备工作 2.1 样品溶剂 原来溶解样品的溶剂，若不合适LC/MS，N2吹干，再用流动相定量溶解。 溶解样品的溶剂一定要和流动相一致，否则得到的谱图不纯，峰形不好，变宽，出怪峰，甚至均为溶剂峰。 由于液质分析时，流动相流速较小（尤其是ESI源时），因此需要注意样品溶剂的强度不要高于流动相 某些固体直接用流动相不溶，可以先加一滴DMSO，再加甲醇或乙腈等稀释。 2、准备工作 2.2 样品浓度 进样顺序要先稀后浓，定量溶解，浓度控制在几个ppM以下，不然容易污染系统，造成本底太高影响分析结果。 浓度非常低的样品不能保存太长时间，容器吸附、分解等原因使样品浓度降低，标准工作液现配现做。 钠盐和钾盐会产生钠/钾加合物，这些加合物比较难打碎，可稀释溶液减少加合概率。 2、准备工作 2.3 色谱柱和管路的冲洗 新的色谱柱以及分析过大量样品的系统，可能要先冲洗很长时间才能干净， 某些样品非常容易吸附在进样阀和管路中 尤其是采用针泵进样时，先用空白溶剂充分清洗管路。 2、准备工作 2.4 流动相条件 如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。 磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。 缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，10mM。 去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生， 表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器 2、准备工作 2.5 色谱柱的选择 根据文献及待分析物的性质选择色谱柱 建议使用细径色谱柱，尤其是ESI离子源时 色谱柱的长度可以不需要很长，由于二级质谱的特点，不一定要求色谱上基线分离 2、准备工作 2.6 离子源选择 2、准备工作 2.7 离子化模式： 碱性化合物宜用正离子方式； 酸性化合物宜用负离子方式； 如未知，可能正负都要做； 有些化合物正负都出峰，选择灵敏度高的方式； 不明确的优先用正离子方式试 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.1 准备待分析物1 μg/mL的标准溶液 尽量使用初始洗脱流动相作为样品溶剂 如果该信息无法获得，尝试50:50的A:B 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.2 初始质谱条件 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.3 寻找母离子 全扫描， m/z 50-2000（尽量缩小这个范围） 寻找正、负模式下母离子的准确质量数 在预计的母离子质量范围将质量窗缩小至 20 m/z 注意：当样品溶液内含有离子抑制物质时，直接进样可能看不到分子峰，此时需要经色谱柱分离或重新处理样品 通常ESI(+)形成：M+，[M+H]+， [M+Na]+ ， [M+K]+ ， [M+NH4]+等； ESI(-)形成，M-， [M-H]-等 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.3寻找母离子（续） 如果有几个峰无法判断分子离子峰是哪个，此时可加入NH4+，观察增加18的离子峰 可通过Flush注射泵，观察某个或某些离子的强度明显增大来确定该离子为样品中带有的而不是溶剂污染物 若看不到分子离子峰，可尝试改变毛细管的电压，观察离子丰度的变化 注意同位素的分布，如含Cl的化合物，有两个母离子峰 确定母离子后，在Q1中输入该质量数，注意输入母离子质荷比小数点后的位数，输入要准，灵敏度才高，而且不容易出错，得到的谱图相对干净。 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.4 优化一级质谱的条件 喷雾针电压， 毛细管电压， Q0和L4 点击上述各按钮，输入需要优化的母离子，点击优化 3、优化MS条件——用注射泵进样： 3.4 优化二级质谱的条件 打开CID气体至 1.5 mTorr 点击“To