创伤弧菌外膜蛋疫苗对斜带石斑鱼浸泡免疫的初步研究.pdfVIP

上海水产大学硕：}：论文：创伤弧菌外膜蛋白疫苗对斜带石斑鱼浸泡免疫的初步研究 创伤弧菌外膜蛋白疫苗对斜带石斑鱼浸泡免疫的初步研究 摘要 随着海水养殖业的发展，鱼类病害问题日益突出。其中弧菌是危 害海水养殖鱼类最严重的细菌性病原之一，可感染多种鱼类并造成大 量死亡。创伤弧菌(W6，fD vutnipcus)是引起鱼类细菌性疾病的一种重 要病原菌。本文从广东深圳患病的鳗鲡肝脏分离到一株致病菌 AnGS020501，经鉴定为创伤弧菌，对其外膜蛋白的提取方法进行了探 讨，与分离自不同地区、宿主菌株的外膜蛋白进行了比较分析，探索 外膜蛋白作为疫苗对海水鱼创伤弧菌的免疫保护效果，为海水鱼弧菌 病的防治打下基础。 1、创伤弧菌的分离、鉴定及其毒力 从自然发病的鳗鲡肝脏中分离到一优势菌株AnGS020501，回归感 表现与自然发病基本相同的症状，表明AnGS020501是鳗鲡的致病菌； 经鉴定确认该菌为创伤弧菌。人工感染试验表明，创伤弧菌 AnGS020501菌株不仅对鳗鲡，对罗非鱼、鲫鱼、斜带石斑鱼及小鼠也 有很强的毒力。ReedMuench法计算该菌对鳗鲡、罗非鱼、鲫鱼、斜 1．56x106 体重。 2、外膜蛋白三种提取方法的比较 摘要 高于另两种方法、但提取的OMP难以区分主要的外膜蛋白：Sarkosyl 效价最高，故认为Sarkosyl法分离制备外膜蛋白的效果较好。 3、不同弧菌外膜蛋白的免疫原性分析 采用Sarkosyl法提取了9株不同来源的创伤弧菌、溶藻弧菌、哈 了比较。6株创伤弧菌的外膜蛋白有相似的SDS．PAGE图谱，主要蛋 伤弧菌全菌血清、兔抗创伤弧菌外膜蛋白血清、鼠抗创伤弧菌外膜蛋 白41kDa蛋白血清有一条共同的免疫反应带，分子量约为41Kda。 41kDa的外膜蛋白可能是这些菌株的共同抗原。 4、创伤弧菌外膜蛋白疫苗对斜带石斑鱼的免疫效果 (1)创伤弧菌外膜蛋白疫苗的安全、有效评价 由于海水鱼一般较昂贵，若能用淡水鱼作为试验动物替代海水鱼 进行试验研究，应是一种比较实用的方法。本试验以创伤弧菌外膜蛋 白等制备成疫苗，对鲫鱼接种后，探讨不同接种途径、佐剂IMSl312 疫苗对鲫鱼免疫的影响，旨为制备海水鱼弧菌病疫苗提供基础资料。 II 上海水产大学硕士论文：创伤弧菌外膜蛋白疫苗对斜带石斑鱼浸泡免疫的初步研究 结果表明：各组都能有效的刺激鲫鱼产生抗体；免疫25d后对鲫鱼攻 (400／比g／mL)组的免疫保护率最高；浸泡免疫组中， I(2蛳g／mL)组最低；外膜蛋白疫苗对鲫鱼有较好的免疫效果，佐 剂IMSl312在浸泡免疫中起到了一定的作用。 (2)创伤弧菌外膜蛋白疫苗对斜带石斑鱼的免疫效果 鉴于对鲫鱼的免疫效果中含佐剂IMSl312注射组的免疫保护率不 高，在对斜带石斑鱼的免疫试验时，未进行含佐剂IMSl312注射组试 验，其它疫苗及接种途径同上。ELISA检测血清抗体水平。注射组抗 体效价明显高于浸泡组，经加强免疫后各组均获得比一次免疫后更好 佐剂IMSl312对浸泡免疫效果有一定的促进作用。不同剂量的 好的。39的斜带石斑鱼获得的免疫保护率为55．6％；表明斜带石斑鱼 在39时可能其免疫器官已经形成，具备了产生免疫应答的物质基础。 关键词：创伤弧菌，外膜蛋白，共同抗原，疫苗，浸泡免疫 11I AbslracI StudiesonVaccineofOuterMembraneProtein Vibrio against in coioides vulnificusEpinephelus Abstract Withthe ofmarinefish animalshadsuffered