生物素-亲合素放大技术..pptVIP

第四部分 生物素-亲合素系统的应用 生物素与亲合素之间结合的亲合力高、特异性强 生物素与亲合素各自均可以与各型大小分子结合，以及二者在结合反应时具有的多级放大作用等优越性 使BAS及其相关技术被广泛应用在各种标记免疫分析技术领域中，尤其为标记免疫检测自动化分析做出了极大的贡献 方法应用 BSA在酶免疫测定中的应用 BSA在荧光免疫技术中的应用 BSA在放射免疫测定中的应用 BSA在分子生物学中的应用 一、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用 BAS在ELISA中的应用 生物素-亲合素系统在均相酶免疫测定 BAB-ELISA夹心法测抗原的原理：用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，与已与固相抗体结合的抗原抗体复合物结合，然后连接亲和素及酶标生物素，从而使反应信号放大，提高检测灵敏度 二、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用 BAS用于荧光抗体技术 通常采用BA法，即用荧光素直接标记亲合素（或链酶亲合素） 游离亲合素（或链酶亲合素）搭桥，两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素（BAB法） 荧光标记的抗亲合素（或链酶亲合素）抗体的夹心法 三、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用 BAS主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联，用于对终反应的放大（BA法） BAS也可用于IRMA反应后B、F成分的分离 四、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用 以生物素标记核酸探针进行的定位检测 用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化 将免疫测定技术与PCR结合建立免疫-PCR(immuno-PCR)用于抗原的检测。 - 报告结束 –请各位专家提出宝贵意见 Dr. Yao Jun, Faculty of Laboratory Medicine in Taizhou College 生物素－亲和素免疫放大技术 培训人：马秀玲 概述： 70年代后期在免疫酶技术中利用生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS)标记抗体发展了又一种新型生物反应放大技术。 主要内容 生物素理化性质与标记 亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记 生物素-亲和素的特点、基本类型及原理 生物素-亲和素系统的应用 维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 第一部分 生物素理化性质与标记 生物素（Biotin)有两个环状结构 I环（咪唑酮环）为与亲和素结合的主要部位 II环（噻吩环）为结合抗体和其它生物大分子的部位，C2上戊酸侧链的未端羧基是结合生物大分子的唯一结构 一、活化生物素 生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物－活化生物素 (生物素化衍生物) II环为噻吩环，其末端羧基是结合抗体和其他 生物大分子的惟一结构，经化学修饰后成为活化生物素 生物素活化 活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物 标记蛋白质氨基的活化生物素 标记蛋白质醛基的活化生物素 标记蛋白质巯基的活化生物素 标记核酸的活化生物素 活化生物素 标记蛋白质氨基的活化生物素 BNHS分子可与蛋白质赖 氨酸的氨基形成肽键 BNHS适用标记抗体和 中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺 生物素N- 羟基丁二 酰亚胺酯 （BNHS ） 如何减小空间位阻？ 长臂活化生物素（BCNHS）： 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团，形 成连结臂，以减少位阻效应的影响 长臂活化生物素 (BCNHS) 是在生物素和 N-羟基丁二酰亚胺之间添加了两个 6- 氨基己糖分子基团，形成连结臂， 使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响, 更易发挥生物素的活性作用 标记蛋白质醛基的活化生物素 生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白(Ag) 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接 后，再与无水肼反应而成。除醛基外， BCHZ还可标记氨基 标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB)能特异地与 蛋白质巯基结合的活化生物素 标记核酸的活化生物素 光生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳香基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B（生物素）-核酸探针 生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） 作为TTP（三磷酸胸苷）的结构类似物，可 采用缺口移位法掺入到双链DNA中。 BNHS和BHZ 可直接标记核酸， 但对碱基配对有影 响（影响氢键的形成） 活化生物素通过侧链与蛋白分子连