微生物感染的诊断与防治..pptVIP

第十三章 微生物感染的诊断与防治 取样部位 不同疾病、不同时期取不同部位标本 如流脑病人取CSF、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程1～2周内取血液，2～3周时取粪便。 尽可能取病变明显部位的材料 取局部病变标本，不可使用消毒剂，必要时以无菌生理盐水冲洗，拭干后取材。 早期采集 采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，且必须在抗菌药物使用前，否则这份标本在分离培养时要加入药物拮抗剂。 尽快送检、冷藏运送 一般标本采集后最好在2h内送检，大多细菌可4℃冷藏运送、特殊（如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保温立即送检。 粪便标本中杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。 2、分离培养（isolation and cultivation）： 所有标本均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用不同培养基。 分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时较久；大多细菌16～24h，结核杆菌需4～8w。 分离培养是微生物学诊断的金标准。 分离培养　isolation and cultivation 分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。 （图为普通孵箱） 厌氧箱 厌氧袋 3、生化试验 各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）。 4、血清学试验： 含特异抗体的免疫血清＋未知纯种细菌进行血清学实验，可确定致病菌的种和型。常见有玻片凝集试验。 5、动物试验： 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。 常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。 6、药物敏感试验 检测致病菌的成分 病原菌的抗原 分子生物学技术 molecular biological techniques 核酸杂交 nucleotide hybridization 原位杂交 in situ hybridization 斑点杂交 dot blot Southern blot Northern blot PCR 技术：多聚酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR ) （三）血清学诊断 采用已知的细菌或其特异性抗原，检测患者血清或其他体液中有无相应特异性抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 在血清学诊断中，最好采取患者急性期和恢复期双份血清标本。 结果：以抗体效价明显高于正常人水平或患者恢复期抗体效价比急性期升高≥4倍方有意义。 常用有凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、中和试验、ELISA等。 玻片凝集实验 细菌学诊断基本方法 二、病毒学诊断 3、标本运送：应立即送检，运送标本中注意冷藏。保存于含抗生素的运送液中。不能立即送检时应存放于-70℃低温冰箱或液氮内保存。 4、标本处理：有杂菌标本应用高浓度抗生素处理（4℃）并离心。 （二）病毒的分离与鉴定 2、鸡胚培养 流感病毒分离培养的最好方法是鸡胚接种。接种羊膜腔（初次分离），尿囊腔（传代）；然后取羊水或尿囊液做血凝和血凝抑制试验鉴定。 血凝试验： 羊水/尿囊液+鸡RBC 红细胞凝集 表明有病毒存在和增殖 血凝实验 3、细胞培养 病毒的细胞培养 细胞培养的优点： 来源方便，容易选择易感细胞。 无免疫力，利于病毒生长。 培养条件易于控制：可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分。 接种量大：细胞可以大量生产，而且还可较久地持续培养。动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制。 加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速，早出结果。 （1）细胞类型 原代细胞 动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长。（人胚肺细胞，鸡胚细胞、猴肾细胞、兔肾细胞等） 二倍体细胞 在体外连续培养50～60代仍保持其二倍染色体数目的细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。 传代细胞 能在体外连续传代，来自肿瘤细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。 优 点 缺 点 用 途 原代细胞 多种V敏感 来源困难、成本高、 分离