氯霉素快速检测法的建立及其在食品安全中的应用.pdf

摘 要 本研究利用杂交瘤技术研制出氯霉素单克隆抗体,建立了氯霉素快速检测方法 并 在食品安全检测中得到初步应用 本研究分别采用羰基二咪唑法和戊二醛法将氯霉素偶联到蛋白载体上 制备出 BSA-CAP和OVA-CAP分别作为免疫抗原和包被抗原 用BSA-CAP免疫BALB/c小鼠 取 免疫鼠脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0作融合实验 筛选出 6株能稳定产生氯霉 素抗体的杂交瘤细胞株 并制备出单克隆抗体 经鉴定 6株单抗亚型均为 IgG1效价 7 9 在1 101 10之间 设计了直接竞争ELISA检测方法 并对包被条件 包被浓度 竞争反应时间等条件 进行了优化 建立了完整的ELISA检测方案 该方法的检测时间在 1.5h之内 最低检 测限为 0.05ng/mlI为 0.9ng/ml与其他几种抗生素的交叉反应均小于 0.1%优于 50 国家现有氯霉素残留限量的检测要求 同时建立了检测氯霉素的胶体金免疫层析方法 采用免疫竞争法 将抗氯霉素单克 隆抗体-胶体金结合物包被在胶体金结合垫上 将人工合成的氯霉素抗原包被在NC膜上 作为检测线 其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体 并以颜 色直观显示检测结果 经实验验证 灵敏度最低检测值为 2.5ng/ml尽管其灵敏度尚 不能达到国标要求 但其检测时间只需 10min与其他几种抗生素没有交叉反应,可以 满足现场初筛的需求 本研究建立了一种快速检测食品中抗生素有害残留的技术方法 可为其他有害物质 的检测提供技术借鉴 对食品安全监控提供技术支持 关键词 食品安全 快速检测 氯霉素 单克隆抗体 竞争ELISA胶体金免疫层析 I ABSTRACT Using hybridoma technique , chloramphenicol monoclonal antibodies (McAbs) were developed and rapid detection method was established with this McAb. This method can be applied in food safety field. In order to establish a rapid detection for chloramphenicol (CAP), the antibody with high titer and specificity must be firstly prepared. So it is necessary for antibody production to synthesize an immunogen by conjugating the hapten (CAP) with a carrier protein. CAP was coupled with bovine serum albumin (BSA) to prepare a complete antigen CAP-BSA by glutaraldehyde (GA) and N-N-carbonyldiimidazole (CDI). The successful linkage of the CAP-BSA was identified by the ultraviolet spectrum (UV) and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. All the above results indicated that immunogen CAP-BSA was successfully synthesized, which was going to be injected in BALB/c mice to obtain immunoglobulin anti-CAP. In this s