安徽砀山酥自然护区梨种质资源的ISSR研究.pdf

摘要 ISSR(简单重复序列区间)属于一种新的分子标记技术，是根据基因组内普遍存 在的微卫星基序设计单一引物，对基因组DNA进行扩增。扩增的指纹图谱可以同时 提供基因组内多个位点的序列信息，被广泛应用于构建分子遗传图谱、鉴定资源类型、 探讨不同生物型之间的亲缘关系。 目前国内已有不少关于果树植物ISSR研究，有关梨树资源的ISSR研究尚未见 报道。本文采用ISSR技术，对安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源26个生物型进行 研究，对合理利用资源、加快梨育种进程有着重要的意义。 研究主要结果如下： l、从适合植物ISSR分析的45条引物中筛选出了16条适合梨树ISSR分析的引 Z29、Z30、Z32。 2、建立了适合梨基因组DNA的ISSR．PCR反应最佳体系如下：总体积25pI， Buffer2．5 其中10x mmol／L、引物o．5ttmol／L、模板DNA ttL、Taq酶o．5u、M矿2．0 O．20 mmol／L· 40ng、dNTPs 3、利用5条引物扩增的特异带构建了供试的梨不同生物型DNA指纹图谱，可 以区分26个样品中的11个生物型：利用8条引物扩增的条带组合构建的指纹图谱， 可以将全部26个生物型完全分开。 4、16条引物扩增出了174条清晰稳定的ISSR条带，平均每条引物扩增出了ll 条ISSR条带，其片段大小为200bp-,-2000bp，150条为多态性条带，平均多态性比 的条带多态性为55．6％。 5、将聚类分析结果进行F检验，当取距离系数阀值为0．703--0．798时，全部供试 生物型分为8类，各类之间遗传距离差异达极显著水平，分类最为合理。第1类有砀 山酥梨及其8个营养系变异类型、鹅黄、早美酥、红香酥、细皮酥、慈梨、库尔勒香 梨、新高、黄冠，聚类距离系数为O．703；第2类是南果梨t第3类包括丰水、鸭梨、 紫酥梨；第4类为马蹄黄：第5类包括香面梨、雪花梨；第6、第7、第8类分别为 伏酥、杜梨、红巴梨。 6、与砀山酥梨相比，其8个营养系变异类型均出现了特异条带。其中，细皮酥 30条、良梨早酥与扁酥27条、王酥21条、油皮酥14条、锈酥13条、八怪酥12条、 棱酥3条。 关键词：梨种质资源ISSR聚类分析指纹图谱 Abstract anew ofmolecularremark． Inter—IsmpleSequenceRepeat(ISSR)istechnique itwas intheconstructionof of appliedwidely geneticmap，discrimination gerrnplasm of betweendifferent basedonmierosatelite resources，discusison relationships biotypes exist in to usedinthe DNA sequence deisgn abundantlygenomic isn酉e-chainprimer DNA chain reaction(PCR)． amplificationofgenomicbypolymerase