大白菜花药和游小孢子培养技术体系的研究.pdf

大白菜花药和游离小孢子培养技术体系的研究 摘 要 生物技术的不断发展和完善，为大白菜育种提供了新的思路和手段，花药培养 和游离小孢子培养技术的应用大大加快了大白菜的育种进程。本课题以】3份春、夏 大白菜为材料，从2001年春到2002年冬进行花药和游离小孢子培养，同时对花培 材料的快速繁殖、倍性鉴定、染色体加倍及大白菜真叶的再生进行了相关的研究探 讨。结果如下： 1．花蕾外观特征与小孢子发育时期的关系：通过细胞学观察表明，当花蕾长为 2．0．3．0mm，花瓣与花药长度之比为1／2--4／5时，50—70％的小孢子发育处于单核晚期， 最适合进行花培。 2．花药培养：不同的基因型材料具有不同的胚状体的诱导能力，在接种的13份 材料中，126最容易诱导得到胚状体，诱导效率达13．71％；不同的培养基的培养效 果也有差异，本研究中以蔗糖浓度为10％、有机成份加倍的Keller培养基的诱导效 率最高，可达到17．58％，MS和Nitch培养基的诱导效率不高；花药培养胚状体的 出现主要在接种后的15～30天之间。 3．游离小孢予培养：采用NLN．13液体培养基进行游离小孢子培养。由培养结果 可见基因型不同，胚状体的诱导率有极大的差异．最易形成胚状体的材料是123， 诱导效率达16，51％；在本实验中，3．5℃低温预处理48小时对胚状体的诱导无显著 高胚状体的诱导效果。 4．胚状体成苗、试管苗快繁和移栽：胚状体转移到琼脂1．0％、蔗糖2．0％、 离小孢子培养的只有54．61％，花药培养的成苗率显著优于游离培养的。花粉植株的 快速繁殖以B 试管苗玻璃化现象严重，用透气膜代替～般的封口膜可以大大降低玻璃化，提高胚 状体成苗率；移栽成活率达到90％以上。 5．花粉植株的鉴定：应用形态学和解剖学特征可以快速初步鉴定花粉植株：染 色体鉴定单倍体植株n=10，正常二倍体2n=20；流式细胞仪可以快速而准确地测定 单倍体材料DNA含量为二倍体的一半，鉴定结论极为可靠；结合上述几种鉴定方 法，可以在短期内对大量的花培材料进行快速而准确的鉴定。 6．染色体加倍：大白菜的花粉植株自然加倍率为40--70％，基因型不同，加倍效 率也有差异。利用秋水仙素结合组织培养诱导试管苗加倍，以秋水仙素浓度为 100mg／L、处理时间10天为宜。 7大白菜真叶的再生的初步探讨：真叶的再生以B +GAl．0me,／L+ABA0．25me／L+AgN035．0mg／L的处理效果最好，再生效率可达60％ 左右。 关键词： 大白菜花药培养游离小孢子培养细胞学观察快繁倍性鉴定 染色体加倍真叶再生 StudiesontheTechnicalof AntherandIsolated System Microspore Cultureof Brassica campestrisssp．pekinensi Abstract TheChinese campestris took cabbage(BTaSSlCO look withthe of onanew along development lines and establishedantherisolated culturecould newsolutionsfor by microspore provide ofChinese cultivarsof andsuinlTler improvementcabbagebreeding．Thirteenspri