不同儿茶素含量树愈伤组织差异表达基因的cDNA-AFLP分析.pdf

，{{～ JIIII I[I[11I I II I I 1[III ＼1735092 摘要 儿茶素类是茶叶最重要的特征代谢成分，也是构成茶叶品质的主要化学成分。研 究儿茶素类生物合成途径中的基因表达，对改良茶树品种、提高茶叶品质具有重要的 应用价值。 本文利用eDNA．AFLP技术，建立了不同儿茶素含量的愈伤组织(“云茎63X” 和“云茎63Y”)的cDNA．AFLP文库：分析了供试材料间基因的差异显示：利用 实时荧光定量PCR技术，分析了儿茶素合成相关基因的表达差异；利用RACE技 术克隆了一个可能与细胞生长发育有关的茶树MYB基因。主要结论如下： 从形态和生长发育上看，“云茎63Y’’颜色发黄、质地略硬、生长较快，而“云 茎63X颜色发白、质地松散、生长较慢；HPLC检测结果显示，两种愈伤组织中 “云茎63Y中各单体儿茶素含量和儿茶素总量均高于“云茎63X”。 利用eDNA．AFLP技术，对两种愈伤组织间的基因表达差异进行分析，共筛选 可分为七类，其中与苯丙烷代谢相关(2条)、与依赖UDPG的转移酶相关(5条)、 与转录调控因子相关(8条)、与物质运输相关(7条)、与信号传导相关(10条)、 与其他代谢相关(17条)及功能尚不清楚(1l条)。 以愈伤组织和茶鲜叶为材料，利用荧光定量PCR技术，分析了cDNA．AFLP文 库中主要预测基因(咖啡酸O．转甲基酶、苯丙氨酸解氨酶、UDPG：花青素3’．O 可诱导的谷胱甘肽．S．转移酶)和儿茶素生物合成相关基因(刚三，F3H，DFR，以尺， ANS和彳ⅣR)的表达差异。结果显示，这些基因均在“云茎63Y中高表达；随着 鲜叶成熟度的变化，这些基因的表达规律并不相同。 MYB蛋白有较高同源性，初步推测，该基因为茶树中的转录调控因子MYB类蛋白 基因，可能与胁迫信号有关。NCBI登陆号为：GU944769．1。 Abstract most Catechinsarethe featuredmetabolic oftealeavesand important components alsomainchemical tothetea on compositionscontributing quality．Studies gene inthecatechins areof for expressions biosynthesisgreat practicalsignificanceimproving breedsoftea andtea plants quality． createdtheeDNA—AFLPofcalluses cDNA—AFLP，this Byapplying study profile 谢tlldifferent catechi啦concentrations(Yunjing63Y”)，analyzed 63X”and“Yunjing differential of geneexpressionsexperimentmaterials；byusing