“黄花”梨离体养及转基因初步研究.pdfVIP

摘要 砂梨(Pyruspyri／oliaNakai)在离体培养中外植体玻璃化和褐变现象严重，且 受其基因型影响再生率低，建立优良的离体培养体系及用于遗传转化的高效稳定的 再生体系一直是组织培养中待以克服的难点。本试验以我国砂梨主栽品种黄花为试 材，研究了防止试管梢玻璃化和褐变的一系列措施，并以黄花梨叶片为外植体研究 了影响愈伤组织诱导率的几个因素．探索通过黄化措施诱导腋生芽萌发，将有强大 腋生芽萌发力的黄化试管梢基部作外植体进行了转基因初步研究。主要研究结果如 下： 1．以砂梨栽培品种黄花为试材，研究了固化剂不同种类及琼脂不同用量、糖源 和6-BA对防止玻璃化梢的作用以及水杨酸和活性炭对防止试管梢褐变的作用．结 止试管梢玻璃化现象的效果好；随着琼脂浓度或蔗糖浓度的增加，试管梢玻璃化率 0．6％和 均呈下降趋势，在兼顾玻璃化率和繁殖系数的前提下分别选择Agarpowder 蔗糖3％为最佳使用浓度；6-BA的浓度越高玻璃化现象越严重，选用6-BA 3mg／L 可有效防止试管梢褐变。 2．以黄花梨叶片为外植体，研究了生长调节剂的不同搭配、2．4-D和6-BA的 不同浓度配比、叶片不同部位和Cef对叶片愈伤诱导率的影响及不同添加物对愈伤 组织生长的影响。试验发现：在不同生长调节剂的搭配中，2．4．D和6．BA的搭配得 1 到了最高的愈伤组织诱导率(33％)，将两者的浓度分别设为2．4-D mg／L和6-BA0．1 有促进作用；叶片的不同的部位中，接近叶柄(带叶柄)的部位愈伤诱导率最高 (83％)；不同添加物对愈伤组织的生长影响不同，添加椰乳时对愈伤组织的增殖有 明显促进作用。 3．将黄花梨健壮的试管梢放置在黑暗处进行黄化处理时，梢基部会明显膨大， 在继续进行暗处理后膨大的梢基部上可萌发出大量的腋生芽，本试验统计每个黄化 的梢基部约萌发80个腋生芽．在可溶性蛋白SDS．PAGE图谱中发现，黄化梢基部 和正常梢基部存在着可溶性蛋白的条带差异．另外，以黄化的黄花梨试管梢基部为 外植体初步进行了农杆菌介导的遗传转化试验，得到了具有GUS活性的转基因梢． 关键词：砂梨；玻璃化；褐变；黄化；遗传转化 Abstract Sand haves6wionsvitrificationand pyri／oliaSahai)cultivars pear(Pyrus browning culturedin andlow becauseof has when vitrot the it regenerationefficiency genotype，SO difficulttOestablish0tissueculture whichis been anda system regenerationsystem efficientand thisre∞砌．thesand isthe steady．In pear“‘Huanghua’whichmajor cultivarinSOuthChinawasusedasmaterialandaseriesofmeasun嚣