Bt基因转化甘的研究.pdf

摘 要 f olerecea ／结球甘蓝(Brassicavar．capitata)，在全国各地栽培，且四季皆可上市， 在蔬菜周年生产中占有重要地位。菜粉蝶及小菜蛾是危害结球甘蓝最严重的鳞翅目 害虫。3龄以后吃叶成孔洞和缺刻。严重时只残留叶柄和叶脉，同时排除大量虫粪， 污染叶面和菜心，使蔬菜品质变坏，并引起腐烂，降低蔬菜的产量和品质。同时由 于幼虫为害造成的伤口，引起软腐病和黑腐病的发生。培育抗病虫品种具有重要意 义。 植物抗虫基因工程是现代生物技术研究领域的重要成果之一。目前人们已从细菌 中，植物本身以及昆虫体内发现并分离到许多抗虫基因，有的抗虫基因己导入植物 体内，获得了抗虫转基因植物。Bt对高等动物和人无害。Bt毒蛋白对鳞翅目的昆虫 具有很强的触杀作用J 本实验将Bt基因通过农杆菌介导的方法转化结球甘蓝，主要结果如下： 1．甘蓝的再生体系的建立 4个供试材料的种子的无菌苗的子叶柄和下胚轴在附加3 mg／L6-BA、O．05mg／L NAA的MS培养基上诱导不定芽发生的频率3％一84％。子叶的分化频率较低，在 3％一8％之间，下胚轴的分化频率较高，在6l％一84％之间。不同苗龄的下胚轴对 芽分化率的影响也很大，以无菌苗6—7d龄苗的下胚轴切段得到较高的芽分化频率。 2．农杆菌介导的甘蓝下胚轴转化体系的建立 不同基因型之间，转化频率相差很大，中甘8号获得Km‘芽频率较高(5．1％)， 而牛心甘蓝却没有得到1株Km7芽，早秋也很难获得转化芽，Km‘芽的频率仅为 O．7％。看护培养可使烟草的转化效率提高，本实验结果表明，烟草悬浮细胞看护培 ‘ 养对提高甘蓝的转化频率影响不大。 3．转基因甘蓝的鉴定 提取Km抗性的植株的植物基因组DNA，对转基因植株进行了PCR扩增和 PCR-Southern blotting分析，共获得转Bt基因的植株12株。 ’。。●。___-‘’一 v／ 关键词：甘蓝、Bt．遗传转化 of oleracea ontransformation Study Cabbage(Brassica Bt var．capitata)withgene ABSTRACT olereceaa inChinaand L．)is an majorvegetable Cabbage(Brassica crop plays rolein and ofthe all suppliesvegetable importantproduction larva(PierisLinne)andDiamondbackmoth cabbageworm rapae the of whichdothemostserious Linne)are to xylostella pestsLepidoptera