气相层析操作原理及应用.pptVIP

Backflash : 所有的injector皆为热的injector (除了on-column injector外)，样品进入injector之后迅速蒸发膨胀，随着Carrier gas进入column内；但超过一定注射量的样品，充满liner ( inset ) ，冲过injector内carrier gas管路以上的地方，造成逆流称为Backflash。如此大的体积进入column会拖的很长，造成一个宽而拖尾的peak；如果backflash遇到injector较冷的部份如：septum或carrier gas进入injector的前段，都会冷凝，冷凝的样品随后会造成分析上的ghost peak。其它进入injector本体和金属面接触的样品会被破坏，造成定量的不准确。 backflash的解决方法有四点：?使用septum purge用于split/splitless injector。?减少注射量。?使用大体积的liner。?改用较佳的注射温度。 Injector温度：Injector温度必需适当，必须高到足以使样品挥发，但不可太高而使样品受到破坏，温度太低使样品挥发不完全或造成宽的peak；如果温度太高会造成高的Backflash及样品受到破坏。如果injector温度设定超过column所能承受的最高温度一般而言不会造成column的损坏。常常我们把injector温度设在250℃，以求得最大的蒸发及最小的Backflash。 Inlet discrimination：在injector内不挥发样品比挥发样品需要更高的温度才能蒸发汽化，由于蒸发汽化速率的差别造成样品中挥发性样品比较能完全进入column；而不挥发样品会有相当一定比率的样品无法进入column，造成不挥发样品peak比较小的现象，称为discrimination。 Syringe： (1) Syringe的选择：依据样品量多少决定，但最少注入量不得少于Syringe 全量的15-20%。 (2) Syringe的使用： 使用前先检查是否有裂痕，针尖是否有变形。 用溶剂清洗5 – 20 次，前三次吸入后将溶液丢弃。 吸样品时采慢吸快放的方式以去除气泡。 吸入超量的样品体积，抽出注射器，轻推注射针的plunger使剩余样 品量等于欲注射量。 吸入小量气体，用清洁的卫生纸将针尖周围样品擦净。 将注射针插入injector内，停留2 – 5秒后，快速将样品注入。 抽出Syringe用solvent清洗，风干再用。 (3) Syringe的清洁：一般使用methanol、acetone、acetonitrile、methylene  chloride等溶液。 (4) Syringe Plunger注意事项： 金属材质的plunger不可使用暴力推拉。 如针尖塞住不可用力推入以免针筒破损或plunger扭曲。 不可仅更换plunger因为不同的plunger与针筒密合度不同。 当syringe为干燥状态下，不可快速推抽plunger。 前有Teflon材质的plunger不可用在60℃超过20分钟。 (5) 针尖的选择： 外径尽可能选择较大的，内径尽量小，才会有较小的dead volume。 黏度太大的样品，可用稀释的方法，不然就需选择较大内径的针头。 针头的清洁用清洁洗液或加热针头使阻塞物灰化。 过滤用的滤膜(Filter)： (1)一般的Filter用于水溶液孔径选择约0.25-0.45 u (2)Nylon材质的Filter适用Organic solvent及水溶液， 但有Protein的样品不可使用，因Nylon材质会  吸附Protein。 (3)DPMF材质的Filter适用Organic solvent、水溶 液及含有Protein的样品。 (4)Teflon材质的Filter适用强腐蚀性的Solvent如 CCl4等。 使用 Syringe 注射的几种方法 使用 Syringe 注射样品比需快速注射样品 , 使样品在管柱前端成为一个小的带状(Band)才能得到好的分析效果 Injector Septum：Injector高温时建议小量注射，否则column会被septum bleed物质干扰。一般建议手动注射每30个样品，autosample注射每75 - 100次更换一次septum。破损的septum使空气进入column造成column加速破坏，使样品逸出造成定量不准确。使用大内径的注射针或septum锁的太紧，septum更换需更频繁。每次更换septum需将温度设定低于30℃，以免烫伤手。 气