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第八章 环境毒理学常用研究方法 第一节 实验准备 1.1 动物的准备 ①选择实验动物 ②编号与标记 ③固定与麻醉 （1）选择实验动物 1）种属的选择原则 在机体反应上与人体近似 易获得、易饲养、易管理 敏感、合适－实验资料 常用动物介绍 ①猫 气体、蒸气对黏膜的刺激 ②豚鼠或兔 皮肤 ③豚鼠 过敏性反应 ④猫、狗、兔 呕吐 ⑤兔和猫 体温 ⑦狗、兔、大鼠 血压 ⑧大鼠和小鼠 致癌 ⑨小鼠 慢性中毒对脏器的损害 2）个体选择 ①年龄：幼年成年，急性实验－成年 ②性别：无特殊要求就雌雄各半 ③生理状态：如怀孕、哺乳 ④健康状态：检查、预检 （2）实验动物的标记编号 染色、烙印、号牌 （3）实验动物的捕捉及固定 做好防护 戴厚手套 用器具固定 （4）实验动物的随机分组 （5）实验动物的麻醉 动外科手术 避免剧烈挣扎 麻醉药物：乙醚 麻醉注意事项 （1）静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应。当这些活动明显减弱或消失时，立即停止注射。配制的药液浓度要适中。 （2）麻醉时需注意保温。麻醉期间，动物的体温调节机能往往受到抑制，出现体温下降。保温的方法有：实验桌内装灯，电褥，台灯照射等。无论用哪种方法加温都应根据动物的肛门体温而定。 （3）慢性实验时，在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。 1.2 毒物的准备 （1）了解毒物的物理常数 密度、溶解度、蒸汽压、熔点、沸点、油/水分配系数等 （2）剂型： 毒性高、刺激性大－稀释 固态－溶液、软膏 （3）溶剂： ①本身毒性很小或无毒 ②不与受检毒物产生增毒或 减毒作用 ③不影响毒物吸收 ④无特殊的刺激性或气味 1.3 生物材料的采集和制备 （1）血液的采集 需求少 刺破组织取毛细血管的血 需求多 静脉采血、动脉 注意：光线、温度、器皿消毒、 抗凝剂 （2）尿液的收集 连续收集 在代谢笼下配置粪尿分离漏斗 一次性尿液收集 逼尿法、导尿法、输尿管插管法 剖腹采集尿液、提鼠采集尿液 尿液收集注意事项 实验期间膳食一致，特定时间完成收集 防止尿液的污染 标本迅速测定或冷冻保存 避免器皿污染 灌喂水或青菜满足尿量需求 （3）粪便的收集 代谢笼、粪尿分离器 外观形态新鲜、完整，分析时取内层粪便 器皿干净 （4）呼出气的收集 研究毒物的吸收代谢和对肺功能的影响 动物需固定 （5） 组织匀浆的制备 酶：取样－洗净－研磨－离心 －测定 用于毒物的测定 1.4 预备试验 （1）选择合适的实验动物 （2）设计染毒剂量及其分组 （3）操作技术的检验和训练 （4）发现新线索、新指标 第二节 常用染毒技术 2.常用染毒途径 吸入染毒、经皮肤染毒－最重要的 灌胃 气管注入 注射（腹腔、静脉、肌内、皮下） 根据实验目的进行选择，同时考虑： （1）人群接触环境毒物的实际情况 生产车间－呼吸道 （2）毒物的理化性质 固态、液态、气态 （3）受检毒物的来源 消耗量的大小 2.1 吸入染毒法－大气污染物 1） 动式吸入染毒法 2）静式吸入染毒法－急性 在具有一定气体容积的密闭容器中或在密封染毒柜内进行 3）面罩染毒法 优点：避免皮肤吸收 注意检查面罩的密封性 2.2 气管注入法 经喉插入法 气管穿刺法 暴露气管穿刺法 2.3 经口染毒法 不挥发性液体和固体毒物 灌胃法－液体或制剂 喂饲法－混在食物中 经口滴入－淀粉糊剂 吞咽－胶囊 2.4 注射染毒法 毒物对局部损害不能太大 ①腹腔注射 ②肌内注射 不溶于水但溶于油或其他溶剂 ③静脉注射 ④皮下注射 ⑤皮内注射 2.5 经皮染毒法 家兔和豚鼠 斑贴法 兔耳法 结膜囊染毒 第三节 毒理学实验的设计方法 3.1 实验设计 明确实验目的、了解毒物、预备实验 实验类型（急性、慢性）、实验动物 染毒方式、浓度分组、对照组（平行、自身） 3.2 动物分组 随机化 第四节 急性毒性实验 4.1 急性毒性实验的内容 ①急性毒性测定－LD50 / LC50 ②皮肤染毒实验－经皮肤进入 ③局部作用实验－有无刺激腐蚀 ④中毒症状的观察－作用程度、部位 ⑤功能及病理组织学检查－部位、程度 4.2 哺乳