第五章色谱分离法新.pptVIP

二、仪器 1.结构流程 2.主要部件 （1）SFC的高压泵 无脉冲的注射泵；通过电子压力传感器和流量检测器，计算机控制流动相的密度和流量； （2）SFC的色谱柱和固定相 可以采用液相色谱柱和交联毛细管柱； SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；专用的毛细管柱SFC； 二、仪器 （3）流动相 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解性好，在紫外光区无吸收；缺点：极性太弱；加少量甲醇等改性； （4）检测器 可采用液相色谱检测器，也可采用气相色谱的FID检测器 二、仪器 三、应用 1.聚苯醚低聚物的分析 色谱柱：10m× 63μm i.d. 毛细管柱， 固定相：键合二甲基聚硅氧烷； 流动相：CO2 ；柱温：120 ?C； 程序升压； 三、应用 2.甘油三酸酯的分析 四种组分仅双键数目和位置不同，难分离； 色谱柱：DB-225 SFC毛细管柱； 流动相： CO2 ；从15MPa程序升压到27MPa；2.5hr完全分离。 第五章 习题 1.薄层色谱中对展开剂的要求是什么？ 2.薄层色谱中的常见问题有哪些？如何解决？ 3.简述凝胶的四个色谱指标的含义。 4.简述超临界流体色谱优于气相色谱和液相色谱的地方。 * 6.定性定量分析 1） 定性分析 比移值定性：标准物质对照。 光谱定性：薄层扫描仪 各种联用检测仪器联用：将斑点吸附转移到试管中，用其他方法纯化，然后进行紫外、荧光、红外等光谱法定性。 6.定性定量分析 2） 定量分析 目视比较半定量法：杂质的限量实验。 测量斑点面积：要求斑点边缘清晰 从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定：先确定斑点，再取下斑点和吸附剂，最后用适当的洗脱剂洗脱分析物，进行测定 薄层色谱扫描仪原位定量测定：紫外－可见吸收测定或荧光测定法。 7.常见问题及消除办法 1）斑点拖尾现象 ▲酸性物质用中性溶剂展开时，造成拖尾。（在展开剂中加入一定浓度的酸）。碱性物质类似。 ▲在碱性氧化铝薄层上分离酸性物质，或在硅胶G板上分离生物碱，由于成盐而造成拖尾。（禁止此类操作） ▲点样量过多造成拖尾（减少点样量） 7.常见问题及消除办法 3）边缘效应 板层中部斑点的Rf值小于两侧斑点的Rf值，这是因为沸点较低的和与吸附剂亲和力弱的溶剂在薄层的两个边缘处较易挥发（用刀片刮去同样宽度的边或增加板层的预饱和时间） 2）S形及波浪形斑点 主要由于吸附剂的颗粒细度和板层厚度不均匀造成（铺板时要注意这个问题） 7.常见问题及消除办法 5）Rf值不稳定 温度、分配系数、展开剂的挥发、板层厚度和不同批号的薄层板都影响Rf值。注意逐一分析。 4）展速慢 加入丙酮等中等极性溶剂可使不相混合的溶剂混合，加快展速。 四、应用 1. 氨基酸分离 薄层:硅胶G板; 流动相: 正丁醇:醋酸:水=3:1:1 Rf值:丙氨酸0.27, 氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐0.08, 磺基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐0.16, 二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸0.20, 亮氨酸0.47, 甲硫氨酸0.40, 颉氨酸0.36, 苯丙氨酸0.49, 脯氨酸0.19, 肌氨酸0.17, 苏氨酸0.25, 色氨酸0.56 2.核苷,核苷酸, 寡核苷酸的分离 薄层:硅胶F254 流动相: 正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3 Rf值:腺苷-5`-磷酸0.35, 胞苷-5`-磷酸0.24, 脱氧腺苷-5`-磷酸三氯乙酯0.74, 脱氧胸苷酰(3`,5`)脱氧胸腺嘧啶核苷0.61, 5-甲基尿苷-5`-磷酸酯(胸苷-5`-磷酸)0.37, 5`-0-磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(3`5`)脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧胸苷0.19, 5`-0-三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰(3`,5)脱氧腺苷0.68, 尿苷-5`-磷酸0.30 四、应用 3.类固醇、固醇的分离 薄层：Al2O3 流动相：C6H6:乙酸乙酯=4:1 Rf值: 胆甾醇0.83, 别色胆甾醇0.77, ?-谷甾醇0.63, 豆甾醇0.62, ? -谷甾烷醇0.44 4.碱金属的分离 薄层: 硅胶卷 流动相：含0.1mol/L I2 的硝基甲烷: C6H6 = 40:60 Rf值:Cs+0.55, Rb+ 0.47, K+ 0.36, NH4+ 0.2