生物工程系《生化分离技术》.pptVIP

班级：生物技术及应用1231 地点：生化分离技术一体化教室6101 课次：10/17 项目3：菠菜中色素的提取技术 任务1：浸提法提取菠菜色素 （4学时） 任务2：溶剂萃取法提取菠菜色素 （4学时） 任务3：薄层色谱法分离菠菜色素 （ 4学时） 任务4：柱色谱法分离菠菜色素 （4学时） 任务5：色素浓缩与干燥技术 （4学时） （8）菠菜色素提取液 （9）硅胶：薄层色谱硅胶 （10）展开剂： 石油醚：乙酸乙酯=3:1（体积比） 石油醚：乙酸乙酯=3:2（体积比） （11）粘合剂：CMC-Na溶液 3.展开（spreading ）：展开剂选择→展开剂预饱和→展开 （一）薄层色谱法相关概念 1、薄层色谱法（thin-layer chromatography）： 薄层色谱法是将吸附剂或支持剂均匀地铺在玻璃板上，铺成一薄层，然后把要分离的样品点在薄层的起始线上，用适当的溶剂展开，最后显色，从而使样品中各组分得到分离的方法。 固定相（stationary phase）：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。如：硅胶、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。 流动相（mobile phase）：色谱过程中携带待测组分向前移动的物质。 主要指展开剂：石油醚：乙酸乙酯=3:1（体积比）。 石油醚：乙酸乙酯=3:2（体积比）。 （二）薄层色谱法分离的机理。 （1）溶质在吸附剂上不断的完成吸附、解吸、又吸附的分离过程。 链接：薄层色谱机理 （2）样品移动的速度与什么有关？ ①溶液中物质的极性有关。极性越大，移动速度越小。 ②与展开剂的极性有关。极性越大，溶质移动速度越大。 己烷环己烷四氯化碳甲苯氯仿乙醚乙酸乙酯正丙醇乙醇甲醇水冰醋酸 （三）、吸附剂和展开剂的选择 1、吸附剂的选择 （1）吸附剂种类：硅胶、氧化铝、硅藻土、聚酰胺 （2）吸附剂选择原则： ①要求具有一定的形状与粒度 ②要求有一定的吸附活性 2、展开剂的选择 （1）展开剂的类型 多元展开剂：含有多种组分的混合展开剂。 展开剂的选择 ①展开剂对被分离的组分具有一定的解吸能力，但又不能太大。 ②展开剂对被分离组分具有一定的溶解度。 （四）薄层色谱操作工艺和控制要点 参见：薄层色谱操作规程 （五）阻滞因数（比移值Rf） 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 2、新任务《柱色谱法分离提取菠菜色素》 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课外 任务 归纳 总结 考核 打分 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课外 任务 归纳 总结 考核 打分 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课外 任务 归纳 总结 考核 打分 薄层色谱法分离菠菜色素 薄层板 制备 点样 展开 显色 各步骤检测方法及操作要点 （六）操作过程总结 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课外 任务 归纳 总结 考核 打分 ①溶剂前沿线不平 ②溶剂过薄层板顶部 ③溶剂点展开效果差 ①点样点大 ②点样量过小 ③点样量过大 ①薄层板表面有麻点 ②薄层板厚薄不均，中间有凹陷 ③薄层板起皮 常见问题 ①放置平稳；薄层板之间距离远；选择好的薄层板； ②展开时注意观察； ③点样量要合适；要预饱和；密封效果要好 ①放置不平，薄层板挨着或厚薄不一致； ②没注意观察 ③点样大；展开槽没预饱和；密封不好； 展开 ①样点吹干后再点第二次 ②将毛细滴管底端弄平再点 ③点样时间控制好，要多练几次 ①样点没干就点第二次 ②毛细滴管底端不平 ③长时间点样不动 点样 ①顺时针方向研磨至浆液沿玻棒成细线性下滴为宜 ②铺匀后，振动至均匀即可，放平晾干； ③晾干后再进烘箱活化； ①研磨程度不够； ②制板时总振动； ③薄层板没晾干就放进烘箱活化； 薄层板制备 解决方法 原因分析 操作过程 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课外 任务 归纳 总结 考核 打分 （七）常见问题分析 七、课外任务—知识拓展 作业：完成《薄层色谱法分离果汁中糖》。 实训指导书 操作要点评分 教学视频 操作规程 参考材料 实验实施方案 任务实施记录 薄层分离板 提供材料 背景 信息 任务 引入 明确 任务 示范 操作 计划 决策 任务 实施 课