虫草素和腺苷的测定(高效液相色谱测定方法).docVIP

十八．虫草素和腺苷的测定(高效液相色谱测定方法) 本方法适合食品中虫草素和腺苷的含量的测定 本方法检测限：食品中虫草素和腺苷为6.0mg/kg。 （一） 方法提要 试样中的虫草素和腺苷经提取后在ODS色谱柱上分离，根据保留时间定性，用二极管阵列检测器来测定虫草素和腺苷的含量。 （二） 仪器 1. 高效液相色谱仪带二极管阵列检测器。 2. 超声清洗仪。 3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。 4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。 （三） 试剂 1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。 2. 甲醇（色谱纯）。 3. 提取液：蒸馏水+甲醇=50+50(V+V）。 4. 虫草素和腺苷对照品，Sigma公司(纯度≥99%)。 5. 虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液（25.0μg/mL）：精确称取25mg虫草素和25mg腺苷,用提取液定容至100.00mL，即得虫草素和腺苷标准储备溶液。稀释10倍后得虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液。 （四） 测定步骤 1. 样品处理： ①固体样品：称取0.2g(精确到0.1mg)于50 mL容量瓶中，加入40 mL提取液，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL，摇匀经0.45μm滤膜过滤，清液待分析。 ②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1 mL)置于50 ml容量瓶中，加入甲醇10 mL，混匀，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL摇匀经0.45μm滤膜过滤，清液待分析。 2. 标准工作曲线制作。精密吸取虫草素和腺苷混合标准溶液（25.0μg/mL）1.0 mL，10.0 mL分别置于100mL容量瓶中，用提取液定容到100mL，摇匀，得到0.25μg/mL，2.50μg/mL虫草素和腺苷混合标准溶液。分别取10μL0.25μg/mL，2.50μg/mL，25.0μg/mL标准工作系列溶液进样分析，以测得的虫草素和腺苷的峰面积，分别对虫草素和腺苷的浓度绘制标准曲线。 3．色谱条件 ①色谱柱：ODS液相色谱柱 150 mm i.d.×4.60mm, 5μm； ②流动相：色谱用水＋甲醇=88＋12（V＋V）； ③流速：1.0mL/min； ④柱温：35℃； ⑤二极管阵列检测器波长：254nm。 4. 样品测定。取样品滤液10μL进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。 （五） 计算 根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中虫草素和腺苷含量，计算出样品中的含量。 试样中虫草素和腺苷含量按下式进行计算。 X= 式中： X——试样中虫草素和腺苷含量，单位为毫克每一百克（毫升）（mg/100g或mg/100 mL）； c——样液的浓度，单位为微克每毫升（μg/ mL）； V——样品的定容体积，单位为毫升（mL）； m——样品的取样量，单位为克（g）； 计算结果保留三位有效数字。 （六） 注释 1. 虫草素化学名称为3脱氧腺苷C10H13N5O3。它溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿。虫草素在野生冬虫夏草中的含量极微，现在研究所用的虫草素一般均是从蛹虫草中提取的。有抗病毒、抗肿瘤作用。虫草素作为一种新型的广谱抗菌素，以其特有的抗菌抗病毒活性，已引起全球科技发达国家的高度重视。它能抑制病毒的RNA合成；对枯草杆菌和鸟结核杆菌均有抑制作用；对HIV-I型病毒也有杀伤作用；尤其对多种实体恶性肿瘤有很强的抑制作用。因此，将其作为一种用途广泛的新药来开发是必然的趋势。为9-β-D-呋喃核糖基腺嘌呤C10H13N5O4。它为白色结晶性粉末或类白色结晶性粉末溶于水极难溶于乙醇。腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张 冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系 统及组织均有生理作用。腺苷是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺 嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中间体。 2