紫外可见分光光度法测定桂蒲肾清片中胆酸的含量.docxVIP

紫外-可见分光光度法测定桂蒲肾清片中胆酸的含量 摘要：目的：建立桂蒲肾清片中胆酸的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法，以60%冰醋酸溶液为溶剂，对样品的提取检测波长为605nm。结果：桂蒲肾清片中胆酸的含量限度为不低于2.0mg/片，胆酸在6.93～41.60μg 范围内线性关系良好，r=0.9996（n=6）；平均回收率99.78%（RSD=0.32%，n=9）。结论：该方法简便、快速、稳定可靠，可作为桂蒲肾清片的含量测定方法。 关键词：桂蒲肾清片胆酸紫外-可见分光光度法 1 仪器与试药 赛默飞世尔（thermofisher ） 紫外分光光度计 GENESYS 10S；梅特勒电子 天平（精确至十万分之一）；电子恒温水浴锅（上海金桥科技仪器厂）；胆酸对照品（购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：100078-200414）、冰醋酸（分析纯）、水为重蒸水、醋酸乙酯（分析纯）、硫酸（分析纯）、糠醛（重蒸至无色）、三氯甲烷（分析纯）。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1对照品溶液的制备： 精密称取经105℃干燥4小时的胆酸对照品13.00mg，精密称定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆酸0.52mg）。 2.1.2 供试品溶液的制备： 取本品，研细，取1.5g，精密称定，置100ml 量瓶中，精密加入乙酸乙酯50ml，称定重量，超声处理30 分钟，放冷，用乙酸乙酯补足损失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液各10ml 于蒸发皿中，在水浴上挥干，用60%的冰醋酸溶液溶解并定容至10ml，即得。 2.1.3 检测波长的选择： 取胆酸对照品溶液适量，加入60%冰醋酸溶液稀释成1ml，再分别加新制的糠醛溶液（1→10）1.0ml，摇匀，在冰浴中放置5 分钟，精密加入硫酸溶液（取硫酸溶液50ml 与水65ml 混合）13ml，混匀，在70℃水浴中加热10 分钟，迅速移至冰浴中，放置2 分钟，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法，于500～700nm 波长范围内扫描，胆酸对照品在（605±1）nm 处有最大吸收。 2.1.4 线性关系的考察： 分别精密吸取上述胆酸对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml 与1ml，分别置具塞试管中，各加入60%冰醋酸溶液稀释成1.0ml，再分别加新制的糠醛溶液（1→10）1.0ml，摇匀，在冰浴中放置5 分钟，精密加入硫酸溶液（取硫酸溶液50ml 与水65ml 混合）13ml，混匀，在70℃水浴中加热10 分钟，迅速移至冰浴中，放置2 分钟，以相应的试剂作为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2005 版一部附录VA），在605nm 波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，记录色谱图，测定结果见表1。 结果表明：回归方程：Y=0.01482X+0.12192，R2=0.99915。相对标准偏差为0.33%。说明胆酸在6.93～41.60μg 范围内线性关系良好。 2.1.5 精密度试验： 取按前法处理的胆酸对照品溶液照紫外-可见分光光度法，在605nm 波长处测定吸收度，重复六次，结果见表2。 结果表明：胆酸的平均吸收度值为0.4027，胆酸的吸光度相对偏差为0.15%，小于2％，说明本试验精密度良好。 2.1.6 稳定性试验： 精密称取桂蒲肾清片1.5084g，按正文方法制备供试品溶液， 将供试品溶液置室温下分别放置0、2、4、6、8、10 小时，照紫外-可见分光光度法，在605nm 波长处测定吸收度，测定结果见表3。 结果表明： 胆酸的吸收度相对标准偏差为0.05%， 小于2％。说明室温下10 小时内本品具有良好的稳定性。 2.1.7 重复性试验： 精密称取桂蒲肾清片样品（批号6 份， 每份1.5g， 按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件，分别测定，测定结果如下（见表4）。 结果表明：胆酸平均含量为3.0172mg/片，相对标准偏差为0.21%。说明重复性良好。 2.1.8 回收率试验： 对照品贮备液的配制：精密称取经105℃干燥4 小时的胆酸对照品0.02812g，置25ml 量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 中含胆酸1.125mg 的对照品贮备液）。 分别精密称取已知含量的样品（批号 含量：7.5493mg/g），每份约0.75g，按80％、100％和120％的比例分别加入胆酸对照品溶液（浓度：1.125mg/ml）适量，按正文供试品制备方法制备供试品溶液， 照紫外-可见分光光度法，在605nm 波长处测定吸收度，计算含量，按下式计算回收率：回收率＝[（测出的对照