荧光素及中红染料间能量转移机理研究及其分析应用.pdfVIP

摘要 摘 要 荧光共振能量转移是一种通过荧光物质间发生荧光能量传递进行分析的实验方法。 能量转移的应用与单个染料光度测定相比，具有比光度法灵敏度高，与常规荧光法和共 振光散射相比受瑞利散射光干扰少，重现性好的特点，该方法已被广泛应用于化学分析、 生物结构研究等领域。本文就此类方法进行了初步的机理研究及其相关应用研究，共分 以下五部分： 第一章：对近年来荧光素类酸性染料及碱性染料中性红在荧光分析中的应用和染料 间非辐射荧光共振能量转移的机理研究及在分析化学中的应用进行了较全面的综述，共 引用参考文献62篇。 第二章：应用荧光光谱法研究了水溶液体系中，酸性染料四溴荧光素(TBF)、四 染料中性红(NR)之间的相互作用。实验表明：NR对各酸性染料的荧光都有较强的猝灭 作用，由荧光猝灭结果求得不同温度下NR与各种酸性染料的结合常数K。发现K值随 反应温度上升而下降且随酸性染料取代基的电负性增加而增大，进一步证实了该反应为 单一静态猝灭过程。由反应焓变、熵变，确定NR与酸性染料间的结合力主要是静电引 力。依据非辐射能量转移机理，得到了不同温度下各酸性染料与NR相互结合时，能量 转移效率、能量给体与能量受体间距离r等参数，各体系r7 m表明该荧光猝灭是通 过非辐射能量转移过程产生的。并发现随着染料取代基的电负性增加，能量转移参数的 一些变化规律。 第三章：四溴荧光素一中性红荧光能量转移抑制法测定肝素。在pH6．65的 之间由于静电吸引而能够发生有效的能量转移，使得能量受体NR荧光增强，同时能量 给体TBF的荧光猝灭。而肝素的加入对该荧光体系间的能量转移产生了明显的抑制作 用，随肝素量的增加TBF荧光依次增强，即能量转移过程受到抑制而发生逆转，由此 建立了一种测定微量肝素的新方法。结果表明，肝素在O．1～2．0 m∥L范围内与TBF的 荧光增强程度呈良好的线性关系，方法检出限O．071 m∥L。该方法用于肝素钠注射液中 摘 要 ％，结果满意。 2．35的B．R 第四章：四溴荧光素一中性红逆向能量转移荧光法测定蛋白质。在pH 缓冲溶液中，酸性染料四溴荧光素(TBF)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引 能够发生有效的能量转移，使能量受体NR荧光增强，能量给体TBF的荧光猝灭。在该 能量转移，产生了明显的逆向反应，并且生成HSA．TBF络合物，利用该络合物的荧光 增加强度与HSA含量间的线性关系建立了一种测定微量血清蛋白的新方法。结果表明， 血清蛋白的测定范围0．6一12．0 m∥L；方法检出限0．25m∥L；六次平行测定相对标准偏 人血清试样中总蛋白含量的测定，与常用的双缩脲法基本一致。 第五章：胶束体系中荧光素与四溴荧光素间能量转移条件及模型研究。研究了阳离 在水溶液中与阴离子酸性染料四溴荧光素(TBF)的荧光反应，发现当CSAA单体与 会产生一个新的、更强的荧光。进而研究了阳离子表面活性剂CTMAB及CPB胶束体 系中酸性阴离子荧光染料荧光素与TBF问的能量转移条件。结果表明只有在带相反电 荷的阳离子表面活性剂形成的胶束环境中，阴离子染料间的能量转移才可能发生，且在 2／3临界胶束浓度(CMc)时能量转移效率达到最大。并推测了胶束体系中染料间能量 转移模型及染料问能量转移的一般规律。 关键词荧光能量转移机理及应用抑制逆向肝素蛋白质 II Abstract Abstract Fluorescenceresonance a11 methodmatisbasedon