穿心莲活性分提制分析及其与生物大分子作用机理研究.pdfVIP

硕lj学f^论文 摘 要 生命科学研究是21世纪最重要的科学研究，药物分析在生命科学研究中占有 重要的地位。建立准确、灵敏度商、简便、快捷的药物活性成分提制分析和质量 监控新方法对药理研究、临床医疗、药物分析有着重要意义。 穿心莲作为常用中药，具有抗菌、消炎、抗癌等多种功效，药用价值极高。 本文以穿心莲为研究对象，以现代新兴样品前处理技术为手段，从穿心莲中提取 以内酯类和黄酮类为代表的活性成分，系统研究了诸因素对提取率的影响，以确 定活性成分最优提取条件。同时建立了穿心莲药材指纹图谱质量控制标准，并对 穿心莲黄酮类代表物质芦丁与DNA的相互作用机理进行了相关研究，以期为新 药开发提供理论依据。具体内容如下： 1．穿心莲中总黄酮的提制分析 采用不同提取溶剂、提取方法、提取条件探索穿心莲总黄酮的最优提取工艺。 结果表明：与常规提取方法相比，微波辅助提取法省时、溶剂耗费少、其总黄酮 提取效率最高。通过正交试验对微波提取条件进行了优化，得到最佳提取条件为： 5 用60％乙醇在固液比为1：1 min。研究采用 g／mL的条件下提取6 方程为A=4．975 明其精密度及重现性良好。用所拟方法对不同产地的穿心莲生药材及：不同厂家的 穿心莲中成药进行了检测，结果表明：因产地相近，穿心莲生药材中总黄酮含量 差异不大；但不同厂家生产的穿心莲中成药中总黄酮含量存在显著差异，因此需 对穿心莲中成药进行质量控制以期达到其最大疗效。 2．穿心莲中穿心莲内酯的提制分析 将酶提取、微波辅助提取等新技术应用于穿心莲活性成分穿心莲内酯的提 取，比较了微波辅助提取法、回流提取法、碱水提取法、超声提取法、室温冷浸 提取法，发现微波辅助提取法提取效率相对较高。进一步研究发现将酶预处理技 术应用于微波辅助提取方法后，其穿心莲内酯提取效率比单纯的微波辅助提取法 更高。将单因素实验与正交试验相结合探索最佳提取条件。实验结果表明：在pH h，后用70％乙醇在 值为5．5，温度为40℃条件下，用1．5mL／g的纤维素酶水解1 固液比为1：15 g／mL的条件下微波提取4min的提取效率最高。用反相高效液相色 谱法测定穿心莲内酯的含量，其最佳色谱条件为：柱温25℃，流动相(经过脱气) mL／min，进样量为10 为V(甲醇)：V(水)=70：30，流速0．8 gL，线性回归方程为： Y=2．06624×108X．141773，r-0．9998，线性范围为0．0007．0．0076 mg，穿心莲内酯 穿心莲衙rlJ戊分提七1分沂毖jC’j生物人分了作用fj!理研究 平均回收率为102．83％，RSD为1．15％(n=6)，方法学考察结果证明其精密度及 重现性良好。用所拟方法对不同产地的穿心莲生药材及不同厂家的穿心莲中成药 进行了检测，结果表明：因产地相近，穿心莲生药材中穿心莲内酯含量差异不大； 但不同厂家生产的穿心莲中成药中穿心莲内酯含量存在显著差异，因此需对穿心 莲中成药进行质量控制以期达到其最大疗效。 3．穿心莲二维指纹图谱的创建 研究采用微波辅助提取法提取穿心莲活性成分，高效液相色谱．二极管阵列检 信息的穿心莲二维指纹图谱。同时结合相似度评价系统及聚类分析方法对穿心莲 样品进行分析。结果表明采收期为8月和9月份的穿心莲指纹图谱与穿心莲共有 模式相似度高。比较不同药用部位的穿心莲指纹图谱相似度，得到穿心莲叶与共 有模式的相似度更高。最后比较不同产地穿心莲药材相似度，发现药材可根据相 似度分为A、B两组，而A组均采自南方B组均采自北方，说明产地是影响穿心 莲质量的重要因素。进行聚类分析发现根据欧氏距离的大小可将穿心莲生药材聚 为两类，其产地分别为南方和北方，与相似度