东方田鼠组织与血清中抗日本血吸虫相关蛋白的分离与筛选.pdfVIP

中国畜牧兽医 2013年第40卷第1期 生物技术 ·33· 东方田鼠组织与血清中抗日本血吸虫相关蛋白 的分离与筛选 成钢。徐春娟，王京仁，李淑红，曾文虎 (湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室，环洞庭湖生物资源保育与利用研究中心，湖南常德415000) 摘要：本试验以兔、牛、人及感染日本血吸虫后小鼠血清蛋白为对照，分别提取东方田鼠和小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、 肾脏、肌肉、皮肤、骨髓和脑组织蛋白，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，综合比较和筛选东方田鼠组织及血清中潜在的抗日本血吸 虫相关蛋白组分。结果表明，随着感染日龄的增加，小鼠在感染日本血吸虫后12和45d，其血清中85ku附近蛋白质条带较 东方田鼠表达量明显上调，且有继续升高的趋势；东方田鼠肝脏及血清中150ku组分蛋白电泳条带与其他动物相同组织中相 应蛋白质在表达量存在显著差异，蛋白质表达丰度高，该蛋白质组分可能与东方田鼠抗日本血吸虫作用相关。 关键词：东方田鼠；日本血吸虫；分离与筛选 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671-7236(2013)01—0033—03 东方田鼠(Microtusfortis，Mr)是迄今发现的 唯一对日本血吸虫(Schistosoma japonicum，sj)有 天然抗性的啮齿类哺乳动物(刘杰生等，1992)，是研 甘氨酸、甲醇等均为国产分析纯。 究抗町机制的最佳动物模型。试验发现，町尾蚴 1．1．2 25～30 试验材料 g雄性昆明鼠(清洁 由皮肤进入Mf体内移行经过肺脏至肝脏，并最终 级)；20周龄(70～80g)东方田鼠(长江亚种人工封 在肝脏消亡(李浩等，2000)；Mf血清较体内组织能 闭繁育第4代)由中南大学湘雅医学院动物学部提 有效杀死体外培养的町童虫(张新跃等，2001)，由 供；阳性钉螺购自湖南省血吸虫病防治所。 此表明，Mf血清和组织中必然含有某种抗虫蛋白。 1．2 方法 血清蛋白是参与机体免疫、物质运输、营养代谢等多 1．2．1MU和小鼠感染$尾蚴在28℃光照条 种重要生理功能的物质，蕴藏着机体主要生物过程 件下，采用常规方法逸出尾蚴，分别腹部感染昆明小 的线索(李祥武等，2007)，开展对Mf血清蛋白质组 鼠(30±2)尾／只；东方田鼠(100±5)尾／只。 学研究，寻找Mf特异蛋白标志物或发现潜在的抗 1．2．2不同动物组织蛋白及血清样本制备分别取 $作用相关蛋白质，是寻求MU抗$作用的重要 适量健康小鼠和Mf的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、 基础和源泉。本研究通过聚丙烯酰胺凝胶电泳方 肌肉、皮肤、骨髓和脑组织，经液氮碾磨后，按照每 法，对Mf组织及血清中潜在的抗虫蛋白进行初步 20 分离和筛选，为Mf抗町机制的深入研究提供新的 试验依据，并为进一步深入研究Mf血清蛋白质组 白裂解液，吹打混匀，充分裂解后，14000r／min离心 学奠定基础。 5 min后取上清备用。另外，分别取健康兔、牛、人血