瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达_庞实锋.pdfVIP

中 国 药 科 大 学 学 报 276 Journal of China Pharmaceutical University 　2004 ,35 (3) :276～279 瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达 1 1 14 1 3 3 3 庞实锋 ,吴晓萍 ,李校　 ,郑 　青 ,于平野 , 曲红艳 ,王艳萍 (1 2 暨南大学药学院生物制药教研室 ,广州 510632 ; 暨南大学国家教育部基因组药物工程研究中心 ; 3 4 ) 医药生物技术研究开发中心 ; 广东省生物技术与生物药物重点实验室 ,广州 510630 ( ) 【摘 　要】　目的: 为了便于追踪瘦素 Leptin 在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成 Leptin 荧光分子 蛋白探针 。方法 :用 PCR 技术将Leptin cDNA 与绿色荧光蛋白cDNA 构建成融合基因L G ,然后将其克隆进原核表 ( ) 达载体 p ET3c 中 ,构建成原核表达工程菌 BL21 DE3 / p ET3cL G。用 Westernblot 杂交检测重组蛋白的免疫原性 , 用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性 。结果 :DNA 测序结果证实设计合成的融合基因与预期一 ( ) 致 ;构建的工程菌 BL21 DE3 / p ET3cL G 获得了表达 ,融合蛋白的表达量 占菌体总蛋白的 40 % 以上 ;Westernblot 杂交检测表明重组蛋白具有Leptin 的免疫原性 ;经 IPTG 诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其 能发射出强烈的绿色荧光 。结论 :融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达 ,表达的融合蛋白具 Leptin 的免疫原 性和 GFP 的发光特性 。为利用绿色荧光蛋白标记Leptin 在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径 。 ( ) 【关键词】　瘦素 ;绿色荧光蛋白 GFP ;融合基因;高效表达 ( ) 【中图分类号】　Q78 　　【文献标识码】　A 　　【文章编号】 2004 ( ) ( 　　瘦素 Leptin 是一种 由肥胖基因 Obese gene , 白,不需要任何底物和辅助因子的参与 ,与 目前常 OB) 编码的内分泌激素 ,全长 167 个氨基酸 ,其 N 使用的报道基因 luc 、lacZ 、cat 、gus 等相比有其特殊 端 2 1 个氨基酸为信号肽 ,其成熟 OB 蛋白即Leptin 的优点[ 11 ,12 ] 。本课题组合成了Leptin 与 GFP 的融 是由 146 个无糖基化氨基酸组成的多肽 ,其活性部 合基因 ,并将其克隆进原核表达载体 p ET3c