致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 LuxS基因的克隆与原核表达.pdfVIP

动物医学进展 ，2014，35(12)：32—36 ProgressinVeterinaryMedicine 致羔羊脑炎粪肠球菌xJo5LuxS基因的克隆与原核表达 郭秉娇 ，卢 帅，王熙楚，郑婷婷，周 霞 ，剡根强 (石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000) 摘 要：采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌)(JO5基 因组 中扩增得到 LuxS基 因的全序列，对其进行 分析，同时与其他细菌相应基 因序列及编码的氨基酸进行 同源性分析；构建该基 因的原核表达载体，对表达 蛋 白进行鉴定。结果显示，该粪肠球 菌)(J05的 LuxS基 因全长 459bp，编码 152个氨基酸，具有功能序 列 HXXEH，核苷酸同源性与 GenBank上的枯草 芽胞 杆 菌和 粪肠球 菌 V583同源性 最高，分别 为 61．2 和 100 ；构建的重组质粒经诱导后表达分子质量为 2Oku的蛋 白质，Westernblot检测显示特异性条 带。说 明)(JO5的luxS基 因与肠球菌V583和枯草芽胞杆菌亲缘关系较近，表达的重组蛋 白具有 良好的反应原性 。 关键词 ：粪肠球菌；LuxS基 因；序列分析 ；原核表达 中图分类号 ：$852．611 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2014)12—0032—05 群体感应 (quo-sensing，QS)是细菌根据种群密 鉴定到了粪肠球菌[1，但还缺乏对这些分离株是否 度大小进行细胞 内或细胞问信息交流、协调群体行 携带和表达 LuxS／AI一2感应 系统及相关研究 。因 为并调控基因表达 的一种方式，可通过 自发释放一 此 ，本试验 以致 羔羊脑炎粪 肠球菌 XJo5为研 究对 些 自诱导信号分子如呋喃酰硼酸二酯 (autoinducer一 象 ，扩增 LuxS基因的全长序列 ，与其他部分细菌相 2，AI一2)来完成细菌种 间的信号传导来维持细菌之 应基因序列和编码蛋 白质的氨基酸序列进行分析 ， 间微观平衡n]。LuxS基因是存在于大多数细菌基 同时构建该基因的表达载体 ，初步确定表达蛋 白的 因组中的一段相对保守 的序列 ，表达 的蛋 白可作为 免疫活性，为 XJ05菌株相应基 因功能的后续研究奠 标志性酶合成 AI一2分子 ，通过 LuxS／AI一2信号系 定基础 。 统完成细菌间的信息交流 ，从而改变胞 内遗传物质 1 材料与方法 的转录和翻译 ，调节细菌的生长代谢而导致如生物 1．1 材料 发光 、生物被膜的形成 、游走、毒力 因子 的表达 、抗生 本试验所用大肠埃希菌 (E．coli)DH5a感受态 、 素的产生、DNA的摄取以及细菌的生存和致病能力 致羔羊脑炎粪肠球菌 xJo5、XJ01、XJ08、xJ11均为 等口_5l。因此 ，LuxS基因及其表达产物在完成菌种 本实验室保存 ；屎肠球菌 TX2466为吴利先老师馈 间信息交流过程中起着关键性 的作用 。有研究者证 赠 ；凝胶 回收试剂盒 、质粒提取试剂盒、TaqDNA 酶 实 LuxS基因缺陷后会对变形链球菌的生长能力及 购 自 TIANGEN 公 司；限制性 内切酶 BamH I、 其蔗糖依赖性生物膜 的形成产生明显影响_6]。操 XhoI、T4DNAligase购 自TaKaRa公司；其他试剂 敏_7发现猪链球菌 2型 (SS2)luxS基 因缺失株 的 为国产分析纯试剂。 AI一2活性显著降低 ，严重影 响了 SS2对试验仔猪 的 1．2 方法 致病力。对哈 氏弧菌和沙 门菌 LuxS／AI一2群体感 1．2．1 序 列结构域分析及蛋 白质序列 比对 利 用 应系统信号分子的合成与降解过程的详细研究也达 DNAMan软件将致羔羊脑炎粪肠球菌 xJo5LuxS 到了对病原菌防治的 目的。 的氨基酸序列与下列物种的LuxS的氨基酸序列进 肠球菌在医学临床中的